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标题:[求助]DC培养新问题：培养基选择，血清添加...

雪山飞鹿[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有几个问题不明白
1用枪补加细胞因子的话不是每次加后都要混匀一下培养基吗，这样不是更影响下面生长的细胞？好像细胞动它越少，它会长的越好。
2你们是几天半换量，每次都要补充GM CSF 50 ng/ mL, IL-4 10 ng/mL, TNF-α 20 ng/mL 吗？每次吸出一毫升培养基又不影响下面逐渐漂浮起来的细胞会不会觉得有难度？
3第几天开始加TNF-α ，加几天能成熟，促成熟只加这一种细胞因子就够了吗，还是要再加其他一些因子比如IL-6,LPS？

谢谢！
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junhun[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.培养液的更换有半量和全量，细胞因子加到新的培养液中，然后再平均加入孔板或培养瓶中。更换培养液很重要，更有利细胞生长。
2.DC有不同的来源所以一些细节不一样，一般1、3、5、7隔天换，每次都要补充GM CSF 50 ng/ mL, IL-4 10 ng/mL, 在收获细胞前一天添加GM CSF 50 ng/ mL, IL-4 10 ng/mL, TNF-α 20 ng/mL ，
3.如果悬浮的活细胞比较多的话，可以考虑收集上清，然后离心，保留这些细胞
4.至于il-6和LPS，各个实验室都有自己的习惯，所以还要看具体的细胞类型
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好楼上， 请问培养成熟和未成熟的树突细胞细胞因子的浓度各是多少，谢谢！！
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是IL-10培养不成熟的树突细胞
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有细胞因子有的用的是UL/ML，有的ng/ml怎么换算？谢谢
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
junhun：再向你请教！如何从大鼠骨髓中分离出DC的前体细胞。能告诉我具体的步骤吗？因为不同文献的方法各不相同，不知道以哪个的为准！
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雪山飞鹿[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #17 zranqi_1 的帖子

您好，您的意思是只要在收集细胞的前一天开始加一次TNF-α 20 ng/mL 第二天就能收集成熟的DCs吗，我最后的目的是想取iDC和mDC，让它们分别与NK共培养，看其对NK的影响。
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雪山飞鹿[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
您好，再次向您请教。

您的意思是只要在收集细胞的前一天只加一次TNF-α 20 ng/mL 第二天就能收集成熟的DCs，而不用连续加几天吗？我最后的目的是想取iDC和mDC，让它们分别与NK共培养，看其对NK的影响。

—————————————————————————————

我现在用的是人外周血单核细胞来源得。

谢谢！
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junhun[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1. iMDC 的诱导方法很多，常用il-10浓度0.2 mg/L
2.GM-csf刺激单核细胞生长，集落增多，il-4促进B细胞的裂解，TNF-α 促进DC的成熟
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hulu呼噜[使用道具]
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发表于 2012-6-8 13:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问有谁做过 将分出的单个核细胞诱导为不成熟的CTL 啊?
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