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标题:[求助]DC培养新问题:培养基选择,血清添加...

junhun[使用道具]
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回复 #31 zranqi_1 的帖子

已经很完备了,你可以当我的老师了,注意无菌操作和规范的实验管理,都是你的强项了。
1.杀几只大鼠,多准备些灭菌的PBS,移液管,离心管,酒精泡骨头的时间不能太长,酒精泡之前,别把骨端剪断,
2.5 ml无菌Tris-NH4Cl溶液悬浮细胞溶解红细胞,充分混匀2-3min,再静置。
3.关于TNf你可以不加,我又看了一些文献,很多人都不用,小鼠用的更多一些;或者收集前一天加入(个人认为TNF作用很大,长时间对细胞没好处)
4.il-10的剂量,10ug/L
5.你要根据你的实际情况决定实验的步骤和进度,一些事情只是原则。
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loli[使用道具]
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楼上有错误的回答!
未成熟DC是半悬浮的,成熟DC是悬浮的
本人研究DC两年以来还没有见过现象是相反的
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雪山飞鹿[使用道具]
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请问junhun
我能用医用灭菌注射用水来融解IL-4,GM-csf,TNF吗?
不知道医用灭菌注射用水能否当3蒸水使用。
谢谢!
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zranqi_1[使用道具]
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雪山飞鹿:你用的是大鼠的IL-4,GM-csf?
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雪山飞鹿[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 zranqi_1 于 2012-6-8 13:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
雪山飞鹿:你用的是大鼠的IL-4,GM-csf?

人的,我作的是人外周血诱导DCs,能用灭菌用水融解因子吗
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junhun[使用道具]
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能用3蒸水最好,不能用就一定要用灭菌的蒸馏水
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zranqi_1[使用道具]
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junhun:溶解细胞因子用后怎么保存?谢谢
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junhun[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 zranqi_1 于 2012-6-8 13:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
junhun:溶解细胞因子用后怎么保存?谢谢



分装后,管口快速过一下火,用封口膜在管口缠一圈,
-20度保存
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zranqi_1[使用道具]
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如果用Tris-NH4Cl裂解红细胞,浓度、PH各应该是多少!yf1204你的DC养的怎么样了!你按以上GM-CSF、IL-4的浓度培养细胞长的怎么样!你在第几天收集imDC和DC。
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薄荷侠[使用道具]
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不知道有没有国产的il-4
GM—CSF TNF-a 国产的效果怎样?
dc 细胞和单核细胞培养冻存怎样?
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