细胞世界

我今天又做了一次上流式细胞仪测凋亡率,还是不行,细胞量太少,我是用
0.125%的胰消化10分钟,然后过100目筛板,500转离心5分钟,去上清液,沉淀用PBS悬浮吹散,我已经失败很多次了,不是细胞碎片太多就是细胞不够,真是很郁闷,各位高手有没有好的办法?

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你试一下用胰酶-EDTA消化, 而且应该在镜下控制反应时间,胰酶-EDTA消化液少一些, 或者多放一些1或2 分钟就倒出去,当细胞的突触收回到近圆形时,加入含血清的培养液中止消化,轻轻吹打即可.做流式一定要保证细胞的良好状态,所以首先要选取生长状态好的细胞, 其次,消化一定要把握时机,即不能消化过度,也不能消化不足, 这样容易吹打过度产生碎片,再次,流式对细胞的数量也有要求,不能过多也不能过少. 过滤与否并不重要,如果细胞数目太少的话就不必了,500转速度太低了,1000转5分钟就行了,我们上学期做了流式,细胞状态很好,实验也比较顺利.

大家好，看到这么多人都作这方面，心里真高兴。
我是一刚刚开始做 “神经元“ 培养的新手。以后会有许多不懂的地方，请大家多指教哦。
今天我主要有3个问题想问问：
1、为了省钱，培养基是不是一般都买干粉阿？做一套试验大约需要多少？如果没有时间限制，我可不可以一次大量买够，然后-20度冻存阿？
2、本来打算用10%胎牛血清，可试验老师告诉我说最好用10%胎牛，加10%马血清。是这样吗？不用马血清养的效果是不是不好啊？那去哪里买马血清？
3、如果第一次养，是不是选胎鼠比较容易些？我怕用新生24小时内乳鼠养不活呢。：（

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1.培养基一般是买DMEM干粉再加一些生化试剂, 你可以现用现配,不用冻存.至于用多少得以你的试验来定.
2.培养神经元是要加马血清的,我也不是很清楚它的原理, 可能每种细胞都有自己适合的环境吧, 有胎牛血清的公司一般也有马血清,你问他们就行了
3.我们培养是用的新生大鼠, 24小时内 乳鼠肯定可以, 主要是比胎鼠方便, 我们也养过胎鼠神经元,没有发现显著性差别

我今天又做了一次上流式细胞仪测凋亡率,还是不行,细胞量太少,我是用
0.125%的胰酶消化10分钟,然后过100目筛板,500转离心5分钟,去上清液,沉淀用PBS悬浮吹散,我已经失败很多次了,不是细胞碎片太多就是细胞不够,真是很郁闷,各位高手有没有好的办法?

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注意:1000转离心是去上清, 500转离心是去沉淀