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标题:[讨论帖]神经干细胞、神经元培养互助小组

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发表于 2012-6-8 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问诸位，我导师因为国外的胎牛血清太贵不主张我买，我是该买四季青的胎牛好呢，还是买sigma的小牛血清？
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junjie05[使用道具]
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发表于 2012-6-8 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我打算做视网膜神经元培养 请各位前辈多指教啊

——————————————————————————————————————————————————

hi, i am working on the cell culture of bipolar cells from rat retina too. i tried 3 times
and all i got was fragments of the cells. this is how i do it:

isolate retina
incubate retina with papain in hank's solution for 50min
wash retina 3 times with normal hank's solution ( i spin the retina, maybe i should not do it?)
tritrarate retina by pipetting up and down(about 15 times) (maybe too much?)
suspend cell in culture dish
i am going to try agian next week and hope me good luck
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-6-8 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也在做皮质和海马神经元培养,但细胞纯度总不是很高,想请教各位如何使鉴定时纯度达到90%,谢谢!
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发表于 2012-6-8 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以做免疫组化来鉴定神经元，为什么一定要纯度那么高呢？
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ending[使用道具]
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发表于 2012-6-8 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

纯化雪旺细胞：⑴.将0.125%胰蛋白酶加入培养液中，倒置相差显微镜下观察，见SC收缩后立即终止消化，轻轻吹打，收集脱落的细胞，接种于新的培养皿中；⑵.将培养皿移入培养箱中孵育2小时，轻轻摇动后吸出悬液重新接种；⑶.重新接种的细胞培养24小时后，更换含阿糖胞苷10-5mmol/l的培养液20µl，作用24小时，更换常规培养液继续培养和传代。
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伊莎贝拉[使用道具]
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发表于 2012-6-8 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是新手，是做海马（脑片）造模的。
我的问题是：1。选择多大的老鼠最好？
2。海马做切片好，还是不切片好？
3。用什么方式的膜片钳记录最好做？
4。细胞培养的问题，看些什么书或者文献，还有就是对于一个细胞培养新手来说，怎样开始实验，是先看书然后自己摸索还是去进修学习，还是怎样？
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发表于 2012-6-8 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问诸位，我导师因为国外的胎牛血清太贵不主张我买，我是该买四季青的胎牛好呢，还是买sigma的小牛血清？？

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其实国外的小牛血清也行，我们用的Hyclone公司的小牛血清560RMB每500ml, 马血清620RMB每500ml, 与国内的血清相比性价比还是要好一些，而且也不是很贵，sigma的小牛血清我们没有用过，不知质量怎样，但价钱可能比Hyclone的要贵一些。国内的四季青大家都反应不错，可以试一试，我们用的是北京元亨圣马的胎牛血清（100RMB每200ml）和马血清(160RMB每200ml)，质量也可以.
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发表于 2012-6-8 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是新手，是做海马（脑片）造模的。
我的问题是：1。选择多大的老鼠最好？
2。海马做切片好，还是不切片好？
3。用什么方式的膜片钳记录最好做？
4。细胞培养的问题，看些什么书或者文献，还有就是对于一个细胞培养新手来说，怎样开始实验，是先看书然后自己摸索还是去进修学习，还是怎样？

谁帮帮我啊
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发表于 2012-6-8 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
求教：
我现在要配神经干细胞培养液，现已有DMEM/F12(1:1),B27,亚硒酸钠，胰岛素，bFGF，牛血清白蛋白，不知行不行（腐胺，孕酮，转铁蛋白都没有）。那些是必要成分，那些不是，请高手指教！
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-6-8 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


1、为了省钱，培养基是不是一般都买干粉阿？做一套试验大约需要多少？如果没有时间限制，我可不可以一次大量买够，然后-20度冻存阿？
2、本来打算用10%胎牛血清，可试验老师告诉我说最好用10%胎牛，加10%马血清。是这样吗？不用马血清养的效果是不是不好啊？那去哪里买马血清？
3、如果第一次养，是不是选胎鼠比较容易些？我怕用新生24小时内乳鼠养不活呢。：（

1、培养基可以买干粉，可以大量买，-20度或-70度保存，当然要注意保质期了。
2、10%的胎牛血清即可，Hyclone最好。
3、一般选择16或17天的胎鼠。
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