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标题:[讨论帖]神经干细胞、神经元培养互助小组

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我想问一下各位大侠, 我做的是原代神经元培养(当然里面混杂有其他的细胞), 我想观察经过干预后正常组和试验组的神经细胞生存情况, 不知用台盼蓝行不行? 如果行,怎么做呢? 谢谢先啦!
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zsxan1990[使用道具]
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有哪位高手配制过胰岛素?怎么溶解?谢了!
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大家好,我是一名新手,细胞现在养的还可以,但第一次做药效不是很理想,考虑是溶媒的问题,我用的是50%的无水乙醇,终浓度是0.5%和0.05%,请教各位前辈,有没有人作过,这个浓度溶媒对神经细胞会有影响吗?还要,你们一般都是拿什么做阳性药?用什么浓度的??
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xueyouzhang[使用道具]
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看见这个神经元培养小组真的是很高兴!
我在培养中遇见几个问题请教大家:1 我用的是胰酶和二型胶原酶联合消化,但消化时间总不能把握好,不是长了就是短了,请问怎么知道细胞已消化成了单细胞。2 有文献上讲,木瓜蛋白酶是一种较好的消化酶,杀伤力没有胰酶强,请问木瓜蛋白酶的工作浓度及用量是多少?谢谢
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xueyouzhang[使用道具]
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我也在做皮质和海马神经元培养,但细胞纯度总不是很高,想请教各位如何使鉴定时纯度达到90%,谢谢!

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可以在培养24小时后加阿糖胞苷抑制非神经细胞的生长。当然,以阿胞的毒性也会打击一下咱们的神经元。
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kulee[使用道具]
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我是这样做的,取出海马组织,用0.25%胰酶37度消化20分钟,然后用吸管吹打,
100目的筛板过滤,取滤液1000转离心5分钟,去上清液加PBS吹打成悬液,但每次都不成功,不是细胞成团就是细胞碎了,请问是什么原因

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It seem that you have treated the tisssue with trypsin too long. Over trypsinization will lead cell death and cell DNA release. The released DNA will make your digestion or cells clump. To solve the problem, you can 1) shorten the enzyme digestion time; or 2) add DNase at the last five minutes of enzyme digestion to degrade the released DNA. Let me know if you have further problem.
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请问各位,你们用过台盼蓝作过神经元细胞的活力实验没有?能给于帮助吗?谢谢先 !
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c86v[使用道具]
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我在做海马神经元凋亡,想请教你们怎么把海马组织制成单细胞的?

我是做纹状体NSCS培养的,也需要制备单细胞悬液,我想虽然我们的目标细胞不同但制备细胞悬液的目的是相同的,所以将我的方法介绍如下,望批评指正、相互交流。
1、取材后将组织块置于小烧杯或离心管中,加入培养基用普通火焰剖光的滴管吹打20次左右,此时培养基会因有大量细胞悬浮而变得浑浊。
2、静置细胞悬液1分钟,使未吹散的组织块沉入容器底部,小心吸取上部细胞悬液,尽量不要吸出组织块。
3、再用自己特殊剖光的滴管吹打10次左右,注意剖光后管口直径大约1~2mm,这样可以使细胞最大限度地形成悬液,又不至于过度损伤细胞。

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我想问一下,做完单细胞悬液后马上用于检测钙离子或细胞凋亡,并不接着用于细胞培养,那在制备单细胞悬液过程中,是否也要象原代细胞培养那样要求无菌原则呢?请各位大侠不吝赐教,多谢了
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vivian4123[使用道具]
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请问各位,你们用过台盼蓝作过神经元细胞的活力实验没有?能给于帮助吗?谢谢先 !

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测神经元细胞的活力,我建议最好的方法还是用MTT,台盼蓝染色计数误差太大,有时结果根本没办法分析
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缘yuan[使用道具]
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有哪位战友养过SH-SY5Y细胞?我从上海细胞所买回来之后,开始用他们带的培养液,养的还挺好,可是换成自己配的培养液之后,细胞状态很差,不怎么贴壁 ,而且也不怎么长,不知道该怎么办?如果有哪位战友养过,能给点建议吗? 先谢过了!
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