[求助]细胞冻存液DMSO浓度是10％还是20％？

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标题:[求助]细胞冻存液DMSO浓度是10％还是20％？

缘yuan[使用道具]
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发表于 2012-6-9 15:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

很多帖子说，冷冻保护液：一般是以9份小牛血清或细胞培养液与1份DMSO混合而成，即DMSO浓度为10％。
还有说，加入培养基、 40% 血清，逐滴加入二甲基亚砜（ DMSO ）至 20% 浓度，即制成双倍的冻存液；，再取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液。即最终细胞混合液中DMSO浓度是10％。
到底该怎么配细胞冻存液？

911[使用道具]
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发表于 2012-6-9 15:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞冻存液确实挺重要的，主要和DMSO有关，因为它既是保护剂又有一定毒性。一般我们都是10％的DMSO，某些娇弱一点的用8％或更少，主要是根据你细胞的耐受力来看的。通常5％－10％的DMSO都是可以的。具体配法应该没有特别的顺序，一般我是最后加DMSO，有时也像你说的第二种方法配。都可以啦！

vera+[使用道具]
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发表于 2012-6-9 15:12 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞冻存液一般有两种配置方法：
1.培养基：血清：DMSO=7：2：1
2.血清：DMSO=9：1
普通细胞系可以用第一种配方冻存，比较娇贵的细胞系用第二种配方冻存，如果实验室条件允许的话，可以都用第二种方法。

缘yuan[使用道具]
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发表于 2012-6-9 15:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

是离心弃上清后，在细胞上直接加细胞冻存液好呢，
还是细胞悬液中加等量的冻存液好呢？？？
哪种方法细胞存活率高？

any333[使用道具]
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发表于 2012-6-9 15:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

DMSO 5～10%
血清20%

==========================================
是离心弃上清后，在细胞上直接加细胞冻存液好呢，
还是细胞悬液中加等量的冻存液好呢？？？
哪种方法细胞存活率高？
==========================================
第一种好

u234[使用道具]
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发表于 2012-6-9 15:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞冻存液：培养液：血清：DMSO
7 ：2：1或者5：4：1
无论选择何种，大原则是DMSO不超过10％，10％指终浓度！

orangecake[使用道具]
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发表于 2012-6-9 15:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

培养液用低糖和高糖有什么关系嘛？

u234[使用道具]
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发表于 2012-6-9 15:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

DMSO浓度8~10%，培养液用原先使用的液体。

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发表于 2012-6-9 15:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细胞冻存中，一般使用DMSO 作为保护剂。在细胞冻存中， DMSO 使用的最终浓度一般是 5-15% ，某种具体细胞的冻存液中的DMSO浓度可以从ATCC查到。对特别敏感的细胞特别是杂交瘤细胞在冻存时使用 95% 血清和 5%DMSO 可能会好些。
DMSO加入培养液后会产生大量的热，若直接加到细胞悬液中会使大量的细胞死亡，所以保护剂在使用时先用培养液或血清配成最终浓度的 2 倍，再与等体积的悬浮细胞的培养液混合。

wsll[使用道具]
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发表于 2012-6-9 15:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

DMSO:培养基＝９：１培养基的血清浓度可适当提高

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