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标题:[求助]HACAT细胞培养相关问题

xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-6-21 10:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]HACAT细胞培养相关问题


打算培养HACAT细胞，准备阶段遇到一些问题：
(1）实验室有些前几届师姐做细胞培养留下的培养瓶，已经拆开包装了，是否可以继续使用？灭菌之后就可以使用还是需要重新洗涤然后灭菌？
（2）使用胎牛血清还是小牛血清比较好？血清是否需要灭活？看到有些战友说最好不灭活，怕会影响营养以及产生沉淀物。
（3）D－Hankds液是否可以不加酚红？考虑到后面要做流式细胞，酚红的存在对检测有影响吗？
（4）试剂有哪些是需要在4摄氏度保存，哪些需要在－20摄氏度保存呢？
以前没有培养过细胞，所以可能问题比较弱弱，还是请各位战友帮忙解惑，谢谢了
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-6-21 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也准备养这个，你的细胞是买的吗？是北京的吗？
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发表于 2012-6-21 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是武汉的，武汉菌种保藏中心有卖的
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发表于 2012-6-21 12:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦 这个我倒是查到了 可是那个细胞株的目录总是打不开 同学你知道那里的报价吗？运输怎么进行呢？
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发表于 2012-6-21 12:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这种细胞株我养过一段时间，应该说比起原代表皮细胞还是比较好养。我们开始用的是无血清培养基培养（DK-SFM)，细胞长得比较干净。后来因为嫌无血清培养基太贵了，需要的细胞量又很大，所以用DMEM加胎牛血清培养，长得也还可以，用于一般的实验没什么问题。我们的经验是加小牛血清没有胎牛血清生长得快，而用无血清培养基生长得要更慢些。
1. 这么久没有用的培养瓶最好不要直接用，要用的话先灭菌。其实培养HaCaT细胞不需要用塑料培养瓶，用普通玻璃培养瓶养也问题不大。而且消毒也方便。
2. 血清如果实验没有特别要求不需要灭活。
3. 我们使用的缓冲液都是PBS。其实只要注意做流式之前重悬的液体颜色不要影响流式结果之外，其余时间液体颜色问题都不大。比如DMEM培养基就是红色的，对实验结果不会有什么大的影响。
4. 试剂保存温度要根据试剂说明书和试剂本身来定。一般情况下，大多数培养基、缓冲液和某些抗体一般都是4℃保存，血清一般是分装后与－20℃保存。用前取出于常温下解冻，没用完的血清不要再放到－20℃，放4℃保存就可以了，也即要避免血清的反复冻融以免影响其效果。
另外HaCaT细胞虽然说是永生化表皮细胞，理论上应该是可以无限制的传代，但据我们的经验，其传代次数过多后细胞形态和生长状况也不如前面的。所以重要的实验最好不要使用传代次数过多的细胞。我们一般是养一批细胞就要冻一些，注意注明代数，以免以后要用。
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-6-21 12:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哦 这个我倒是查到了 可是那个细胞株的目录总是打不开 同学你知道那里的报价吗？运输怎么进行呢？

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我们刚刚去武汉买的HACAT细胞,是1500块一瓶,多加一瓶收100.如果你真的要买的话,建议你用民航特快服务,价格比较贵,是480元一次(当天到达,12个小时以内).加起来花了2080!如果采用邮局才50元一次,不过会花你两到三天的时间,对细胞影响太大了,不知道途中会出什么问题!我们就是先用邮局汇的拿到的细胞就漂起了很多,贴壁的非常少!而且状态很不好!后面没办法只有多花点钱用空运,当天到达的细胞状态很好!
养细胞确实要花心思
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发表于 2012-6-21 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
继续提问
请问DMEM培养基的配制，把粉末溶解之后加多少质量的碳酸氢钠以及HEPES？
另外配制D－Hanks液以及PBS用的试剂（氯化钠、氯化钾等）普通纯的就可以吗？还是需要特殊级别的？
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发表于 2022-6-2 14:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好，我们的HACAT也是从武汉典藏中心买的，我们用的血清是PAN 南美胎牛血清。我一般培养用的是培养皿，而不是培养瓶。如果是你买的细胞的话都会有细胞操作培养说明，培养基他们其实用的是直接买的DMEM高糖含丙酮酸那的
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 小中大
你好，我们的HACAT也是从武汉典藏中心买的，我们用的血清是PAN 南美胎牛血清。我一般培养用的是培养皿，而不是培养瓶。如果是你买的细胞的话都会有细胞操作培养说明，培养基他们其实用的是直接买的DMEM高糖含丙酮酸那的
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 小中大
你好，我们的HACAT也是从武汉典藏中心买的，我们用的血清是PAN 南美胎牛血清。我一般培养用的是培养皿，而不是培养瓶。如果是你买的细胞的话都会有细胞操作培养说明，培养基他们其实用的是直接买的DMEM高糖含丙酮酸那的
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