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取细胞按一定密度接种于24孔板，待细胞生长状态恢复，且细胞密度小于满培养皿单层细胞数的50%时，弃去原培养液，加入含不同浓度G418（200-800μg/ml）的完全培养液，每个浓度设3个平行孔，三天一换液，继续培养2周，观察细胞死亡情况，以高于杀死全部细胞的G418最小浓度的一个梯度为筛选浓度，以筛选浓度的一半为克隆细胞维持培养的浓度。

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