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标题:[分享帖]总结的MTT方法原理

skytree[使用道具]
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11
 
我用MTT作药物的增值情况,看过楼主的也想写一些。
1.文献很多用470nm作为测定波长,也有用双波长来测定。我用双波长测吸光值。
2.加入待筛选样品后的培养时间最好也自己考察,每种样品的作用情况都不一样,我的样品就是在加药48小时时最佳。
3.关于调零孔:二甲基亚砜遇光不稳定,变黄。楼上说低速振荡10 min是否在蔽光状态下操作?本人试过加完培养基、MTT,吸尽溶液后,再加二甲基亚砜,分别于2-3min,和15min时于双波长下测吸光值,发现值分别大约为0.05,0.3,差别大,而样品孔变化有细微差别不大。不过我用的是国产的,国外产品没测过。我想应尽快测。能自己考察一下测定时间最好。
另外,二甲基亚砜会腐蚀微量取样器,用时小心别再沾枪身上,我已经被二甲基亚砜弄坏一把微量取样器了。

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应该是570nm吧?
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october7[使用道具]
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据说可以用可以拆卸的96孔板.这样就不需要有大量的96孔板了吧.
我正在买
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vivian4123[使用道具]
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哪里可以买到cck-8啊?价格如何?谢谢!
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阿司匹林[使用道具]
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我们实验室测定的波长是570nm,请问不同的波长是不是影响很大?选择波长的依据是什么?
另外,我做的是悬浮细胞HL60和K562,在加MTT和SDS-HCl 是需要将上清液吸出来吗?
我上面的师姐在加MTT是都不是在无菌条件下加的,请问这是否有影响?
由于我从细胞培养到加药,加MTT,加SDS都未曾将孔里面的东西吸出过,这样会不会做出的结果没有差异?
实验郁闷中,请各位高手指点,谢谢
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newway[使用道具]
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用MTT检测法测定CMC

1. Fen细胞培养于含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中,在25cm2培养瓶中生长到接近汇合。用含0.05%胰蛋白酶,0.02% EDTA的PBS消化细胞5分钟,洗涤后,用细胞培养液将细胞配成1×105/ml。

2. 取96孔细胞培养板,每孔加0.1ml细胞悬液,在37℃ 5% CO2的饱和水汽二氧化碳培 养箱中培养24小时,让细胞帖壁。每孔加0.1ml效应细胞悬液,效靶比10:1到50:1,继续培养4小时,让效应细胞发挥杀伤效应。实验中,设立只有靶细胞的无杀伤对照和只有 效应细胞的阴性对照,每种处理设3各复孔。

3. 用含2%小牛血清的RPMI-1640培养液洗涤各孔 3次,洗去不粘附的细胞。每孔加 0.1ml含2%小牛血清的RPMI-1640培养液和10μl 5mg/ml的MTT染液,继续培养3小时。

4. 用PBS洗涤2次,每孔加0.1ml含0.04mol/L HCl的异丙醇,室温30分钟,溶解形成的结晶。在570nm波长处,用酶联检测仪检测各孔的光吸收值(OD)。

杀伤活性(%)=(OD实验孔-OD阴性对照) /OD无杀伤对照× 100
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gemei0115[使用道具]
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哪里可以买到cck-8啊?价格如何?谢谢!

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eric930[使用道具]
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请问悬浮细胞的MTT怎么做,实验步骤一样吗?还是怎么样?我也准备要做了!
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zranqi_1[使用道具]
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请问悬浮细胞和贴壁细胞共培养后,做悬浮细胞的MTT怎样做啊?哪位高人帮帮忙,多谢!!!!
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fei1226com[使用道具]
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悬浮细胞在加MTT或SDS-HCL时不需将上清吸出,依据中国药理学通报2003May《半边旗有效成分5F注射液体内外抗肿瘤药理作用研究》。加入MTT后需要再培养一定时间,应无菌加入 。
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zranqi_1[使用道具]
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我的MTT一块96孔板可以做3个时间段,分别是48小时,72小时,96小时,而且就再酶标仪上震荡10秒钟就测,效果不错
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