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标题:[求助]无液氮罐，如何冻存细胞

DDD[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

-70度可以放一年。估计时间够你用了。
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dog002[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

能保证一年的估计也就无限了我觉得
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我这里没准备-70度冰箱呢，一般在-30度冰箱能存多久呢？
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remenb[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

-30 数小时吧，0度 到-60度都是细胞的危险温度，不能久放
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

冻存细胞4度10分钟,-20度半小时, -80度过夜后放液氮或直接放-80度保存, 效果不错
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1. 选用对数生长期细胞，在收集细胞24小时前换液一次。
2. 用常规方法将细胞消化下来，按（1～5）×106/ml浓度、悬浮于含有10％ DMSO的小牛血清或生长液中。冻存的细胞数量要充分，因复苏时接种的细胞数量应比平常多一些。
3. 用吸管吸取细胞悬液，分装于无菌安培管中(没管1ml)，严密封口，放入三层纱布小袋，注明细胞名称和冻存时间，便于以后查找。
4. 冻存 当前已有专用细胞冻存器，能精确地控制冻存温度。在无冻存器的情况下，可用手工方法。从把安培悬液在液氮容器口开始，在30～40min内，下降到液氮表面，在停30min后，直接投入液氮中。或先将安培移入液氮罐口颈部气相中过夜，次日将纱布袋缓慢下降至液氮中，历时3分钟。在液氮中可长期保存。 若没有液氮，可存于-80冰箱内，不过注意保存时间，比液氮短，可保存3个月左右
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qqq111[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，大家都是从书上看的吧。
实际上，我认为eric2231 同志的慢冻速溶原则是正确的。
慢冻是要给DMSO以渗透入细胞的时间，所以我的经验是4度的半小时要保证，之后就基本上可以马上冻起来也没有什么关系了。
azhengyan01 同志的毛巾包裹法十分新颖，呵呵。不过，从原理上看，确实是值得尝试的好方法，既保证了时间，又省去了搬来搬去的麻烦。
至于-80度的保存时间，我亲眼所见，半年绝对没有问题。
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owanaka[使用道具]
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发表于 2012-7-27 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你没有液氮罐，在４度的情况下，要看你是什么细胞了，如果是老鼠的细胞可以放１小时左右，其他细胞最多半小时（本人做过试验的）；在-２０度的情况下，老鼠的可以放１天左右，其他细胞半天，但其状态不是很好了；在-７０度的情况下，老鼠的细胞可以放１到２年，在此期间要复苏一次看其生长情况，其他细胞最多一年了，我也是自己摸索的，也请大家指导指导！
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