细胞世界

楼主你好，我这个月分离的细胞几乎每次都出现了这种情况，有时轻（培养2－4天出现虫子）有时重（隔天不到24h即出现这种情况）。我自问液体的配制过滤都已经十分小心，所有分离细胞要用的管道系统都用双氧水清洗消毒，可是依然出现这种情况！！这个学期在这之前我分离的细胞每次几乎都没有污染，活力也很好，而现在即使无菌操作12分小心甚至都到了草木皆兵的地步，这种虫子却接二连三的出现！！我失败的次数不比楼主少，所以楼主与我可说是同病相怜。分离细胞从清洗瓶子、消毒、配液体、过滤最后到分离操作要付出多少劳动多少心力，可是到最后所有的劳动都白费了！！
虽然痛苦，不过楼主一定要撑下去，我们细胞室的条件也非常差，没有隔离，进出人员繁杂，甚至有一个超净台的滤网都已经没用了！！
我已经把我所有的液体都放进培养箱孵育，看看结果如何。再者，另外找不同来源的大鼠，操作的时候加倍小心，避免弄破肠道，加大双抗剂量，重新过滤血清、更换超净台等等。看了上面战友们的分析和建议，也让我启发不少。
另外，我有一个问题请教，我在小牛血清中发现有一些黑色的小点点在动，慢慢蠕动，有的是原地有的则缓慢的短距离蠕动，不知道是否是污染源。奇怪的是，我将不同厂家的血清放入培养箱，都看到了我说的这种东西，但是放了很久以后（6－8天）这种小东西并没有增多，也没有增大，外形没变，血清和培养液依然澄清。
我现在担心的就是方向错了，如果是血清里面进去的，那么任我换多少老鼠都是无济于事的，如果是老鼠的问题，那么是否血清里面的这个东西可以不予理会，请各位战友帮忙参谋参谋！
还有，所谓的黑焦虫是什么东西？

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你好！真不敢相信我们的情况如此相似。你说的这些，很多是说出了我没说的话。如果文字叙述没有误差，那我们实验室条件、污染的情况，都相似。
1、你出现污染是全板污染还是个别孔污染？ 这点你没写明。我起初是全部出现虫子，在12－24小时内！后来”变本加厉“式的小心操作之后，开始出现个别孔污染，并开始出现第三、四天才出现的污染。 如果你不是整个污染，又用的都是同一瓶培养基、PBS、淋巴细胞分离液，那我认为可以排除上述液体的污染，因为若是这些液体污染，应该不会出现有的好，有的坏的情况吧？不过近20多天我的DC还没有生存到7天，都或早或晚的污染，最近这次已经四天，还在观察中。
2、你在本站搜索黑焦虫，会有很多帖子，可供学习。我觉得这些虫子不是黑焦虫。
3、至于是老鼠还是血清……直觉上，我倾向于老鼠…… 思索…… 血清中看到小黑点是放入孵箱之前还是之后？ 单纯将血清或培养基放入孵箱，小黑点不增多，是否可说明其没有繁殖力？你出现的虫子是否数目增加很快？

我已经将想到的避免污染和改进措施列出来，准备这个周六再重新找不同来源大鼠再分离一次，结果如何到时候汇报，如果有所好转我们再交流！！

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你做的很好，比我条理一些，可否将改进措施列出来交流讨论？
我觉得对于目前我的情况，最快最彻底的方法是换个好点点的实验室…… 还有这个虫子为何以前不出现……我认为也与天气气候有关。你在哪儿？我在重庆医科大学……

谈谈实验室的整体无菌质量控制问题:
我是做胚胎的出身,和养细胞差不多,可能要求更高些,谈谈我对于污染问题的看法:
1:由于我们国内作实验很多东西都重复使用,因此重复性使用器械的消毒工作一定要确实;
2:培养液的消毒也很重要,由于一般情况下,培养液一般放于冰箱,因此即使有污染,肉眼也看不出来,一旦开始使用,才知道污染了;因此培养液和冰箱的洁净度要注意;
3:操作过程应当注意无菌,当然对于医学的同仁都是常识了:
4:最难控制的就是实验室环境了,一些国外回来的洋博士总是说国外如何不污染,他们是对的,但是国内外不同吗,作为我们实验,应当注意到环境污染的可能性,并加以克服;
控制污染最好的办法就是:
1:带灭过菌的橡胶手套;
2:使用一次性的器械(如果经费允许,有时细算一下,实验失败一次花的钱,可以购买很多一次性器械,同时节约了时间);
3:尽量保证细胞培养所需要的实验室环境;
4:严格的个人操作过程

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感谢战友的经验和指导！记下，学习中…… 实验室条件及管理，对于实验成败真的关键。设备大家公用，老师不管理，就容易乱。