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标题:[求助]我养的树突状细胞出现大量条状虫子,细胞在12小时...

loli[使用道具]
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另外请问你的培养板是从哪里买的,我同学买的是不到五块钱的板子今天主任看了说这种是经过二次处理后的板子,不能用,他师兄买的是国外产的20块千的板子,污染的机会就小多了
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loli[使用道具]
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建议你同时用培养瓶和培养板作做,以便寻找污染源,我同学的培养板培养的细胞全部都污染了,而用培养瓶养的没污染
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abc816[使用道具]
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楼主,周六分离的细胞在培养了48h时未看到虫子。
但是细胞活力非常差,几乎没有什么细胞伸展,多数细胞透光性差并且出现空泡和颗粒,我预感虫子又要出现了。
果然的,今天看(第三天)几乎每孔都已经可以看到虫子,有长的丝状的,不怎么游动,也有短小的杆状的,在细胞间忙碌的游来游去,钻进钻出,心里除了打击还是打击,我决定暂停细胞培养。
试了这么多措施,也换了好几批动物,最终的结果还是这样,看来是有些因素我们无法改变和控制的了,唯有先放一段时间再说。我现在也在联系后面动物实验所需要的试剂,查资料,设计实验方案,总之,过了这个梅雨过了这个炎夏再说了!!
祝我们都好运,兄弟!!

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嗯,感觉这东西好像非典病毒似的,来得铺天盖地,消失的时候也快的很。我不是说最后培养的那次还剩了一半细胞存活吗?昨天是第十天了,可以拿去做流式了,作流式前的操作是不需要无菌的,我直接在桌面上将培养基从培养板中吸出,装进EP管,拿到楼下琢磨了一下,担心细胞数量不够,加上因污染造成的添加细胞因子不均衡的问题,心想这次算了,不作了。就又拿回去,扔掉可惜,就想做个污染实验试试吧。又将培养基从EP管里吸到培养板中(我用的吸管也是上次添加细胞因子用过的,没消毒)。觉得还不够,就将培养板盖子拿开,将培养基在桌面上晾了几分钟,心想如果房间里有虫子这下该污染了吧。完了就在房间里放着,也没放到孵箱中。
……今天中午拿了培养板到显微镜下看,心想应该可能有大量虫子,但你才怎么着?细胞竟然长的好好的,连细菌污染都没有!考…… 我不甘心,将培养板放进孵箱,看看明天是否会出现污染。 真够晕的,今天这个结果。
但我近期还想以免疫组化为主……有余力时,就再原代培养一次试试……
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abc816[使用道具]
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楼主,周六分离的细胞在培养了48h时未看到虫子。
但是细胞活力非常差,几乎没有什么细胞伸展,多数细胞透光性差并且出现空泡和颗粒,我预感虫子又要出现了。
果然的,今天看(第三天)几乎每孔都已经可以看到虫子,有长的丝状的,不怎么游动,也有短小的杆状的,在细胞间忙碌的游来游去,钻进钻出,心里除了打击还是打击,我决定暂停细胞培养。
试了这么多措施,也换了好几批动物,最终的结果还是这样,看来是有些因素我们无法改变和控制的了,唯有先放一段时间再说。我现在也在联系后面动物实验所需要的试剂,查资料,设计实验方案,总之,过了这个梅雨过了这个炎夏再说了!!
祝我们都好运,兄弟!!

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你说的“细胞活力非常差,几乎没有什么细胞伸展,多数细胞透光性差并且出现空泡和颗粒”,根据我的经验,其实此时你若微调焦细观察,可能会发现有零星的幼虫的!你预感的没错。你说的其余的情形我们是一样的!真是不可思议。 另,你在哪儿做实验? 我在重医附一院。正如你所说,似乎“有些因素我们无法改变和控制的了”…… ……
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abc816[使用道具]
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我同学最近原代培养的神经细胞总是污染,今天又发现培养的细胞里长出里了杆状的虫子,不过好像不是黑色的。教研室的主任让他把所用的培养基和液体全部重新过滤一遍,还说如果是最近一段时间老污染可考虑暂停实验,过一段时间在做,他师兄去年也是这样,停了一段时间后在做就再也没有污染过了

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虫子的确不是黑色啊,准确的数是和细胞一个颜色,有点透明。
我用的是进口培养板。
我们实验室也是培养瓶出现污染的很少,培养板污染的多。
我这个细胞用瓶养,不方便。
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过这种情况,当时我的污染更严重,有两种细菌,一种是培养孔中朦朦的一片,另一种是那种活动的杆状东西。而且,杆状常常聚集在细胞周围,生长比朦朦的那种有优势,一旦出现就不能救回。当时我是一周灭菌2~3次,后来每天灭菌,换了培养基就好了。
当时曾经把污染细胞上清收集后离心,图片,革兰氏染色,在油镜下看到红色杆状物,有分节,很多,呵呵,那种朦朦的是蓝色的球菌,数量不多,也很清楚。
把培养基放在孵箱37度3天,未见浑浊,直接取培养基10ml,离心后弃上清涂片,也看到了这两种东西,所不同的是杆状物较少,球菌更多。
楼主不妨试试,反正不麻烦,与其使劲分析,不如让事实说话。
PS:那种杆状物在油镜下仍然很小,要仔细找。
这是培养基中的:


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这是培养上清中:


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ladyhuahua[使用道具]
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我培养的是昆虫细胞,现在也发现了这种污染,我们老师说是放线菌,繁殖很快。我觉得可能是实验操作中的问题,因为一批处理的细胞只有部分污染,而我换了培养基和血清,还是有,但是同样的条件下别人处理就没用,所以大概是处理不当的原因。
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junjie05[使用道具]
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放线菌?我想可以考虑这种污染。
放线菌是不是可以产生一种叫做放线菌酮的物质,这对细胞杀伤力很大。
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qhyu[使用道具]
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总算看到这一贴了,我最近才要到的两种细胞也被这种线状“虫子”污染了,还没来得及扩增冻存,哭泣中。细胞到现在还没要到,半个月实验停滞中。……无语。这种线状“虫子”究竟是啥啊?因为用同一瓶培养基和血清养的另外一种细胞一点事没有。而且我发现培养基会混浊,但细胞还有存活的,只是状态较差,我用PBS反复冲洗,培养基中加抗生素,勤换液都没有挽救回来,呜~~ (另外,我也在重庆)
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