细胞世界

谢谢以上各位同仁的回答！！
1.昨晚把血清量加大了，但是还未见好转。现在是传代后46小时了。
2..操作过程中不存在消化时间过长问题，我的操作是先用胰酶（无EDTA）润洗一遍，后再加胰酶覆盖瓶底，于最多2分钟内终止消化。
3.培养液PH值在7.2~7.4左右，用前已经用PH试纸检测了。因为是无CO2罐培养，加培养液后一小时内，就会观察到培养液变成紫红色，但是我并不能解释原因。
4.真的是血清过滤的问题吗？有没有那位同仁也出现过类似的情况阿？已经传代这么长时间了，就算细胞未死，活力也不行了吧，没挽救的必要了吧？

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1 我用的血清的量一般在5－10％
2 消化建议不要用胰酶润洗改用pbs，另外加胰酶的量不用太大，只要能够覆盖瓶底就行，消化时间不必太长，只要在镜下看到细胞飘起来就中止消化（你的消化时间不算长）吹打时尽量避免大量气泡产生。
3 胰酶、pbs、 培养基从冰箱拿出来后，在37度水浴箱里温浴一下，以免低温对细胞造成不必要的伤害，当然时间不宜太长以免对血清品质造成影响。
4 血清正如楼上那位大侠所说不要过滤，以免一些营养因子丢失。血清最好在－20度储藏，如果放在4度储藏的超过一个月的不要使用。买回来的血清不能直接到37度水浴箱溶解，而要放在4度一天后，至室温溶解分装使用，这样逐步溶解时为了避免温度变化太大造成血清蛋白凝结沉淀。
5 所有东西在消毒一周内使用，使用物品如装培养基的瓶子等在放进操作台之前，都用75％酒精搽一下。
另外我有个疑问 没有co2的培养箱能养吗？请大侠们指教。谢谢！

能养哈~我们这的实验室都用的是没有充CO2的CO2培养箱培养的哈~~效果肯定没有充了CO2的好，但是也一样能用哈~~只是换液要换的勤些吧~~

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“用没有充CO2的CO2培养箱培养”，必须注意：
1、培养液必须加HEPES。
2、最好是密闭培养，防止二氧化碳逸出。