小中大
老鼠的只数不必太多,只要每次消化完全,就能够得到所需细胞数,7-8只足够了。个人认为是你消化的程度过了,我以前做也是每次离心时看到的细胞很少,为了得到更多的细胞延长离心时间,结果又损失了部分细胞。后来降低酶的浓度,每次消化10分钟,离心后都可见到细胞,状态很好。其实你可以观察,如果你收集的细胞状态好的话,贴壁的时间就早,90分钟分离就可以了,细胞悬液里大部分为心肌细胞,如果消化的不好,90分钟后成纤维细胞也不能完全贴壁。建议你从0.06%的酶浓度开始做起,或设几个浓度找出最佳条件,一定要控制好37度的环境,很重要(可以在孵箱中进行),10分钟,收集除第一次的细胞悬液。过筛网不是必要条件,我每次都做,是为了计数种板更准确些。