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标题:[讨论帖]关于96孔板铺细胞的几个问题

idea2011[使用道具]
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发表于 2012-8-14 12:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实如果想省钱的话,直接用96孔板的包装盒(塑料的那个)就行
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乌贼老弟[使用道具]
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发表于 2012-8-14 12:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
3.为了防止细胞在孔里生长不均，可以提前把96孔板放进培养箱几个小时，然后再取出加细胞，加后 静置5分钟，再放入培养箱。

————————————————————————————————————————————————————————

请教一下，这个是什么原理啊，我做24孔版的是后也是细胞容易聚到中间，我的做法是把板子左右倾斜后静止，效果一般
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gogo[使用道具]
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发表于 2012-8-14 12:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我以前也存在细胞不均匀的问题，影响结果真的很头疼。

现在我是竖着加细胞，横着给药～～呵呵

不是后面两位理解的手势问题噢，试想，假设存在细胞吹不匀的问题，除了注意吹匀外，按照这种方法可以平均你的实验结果，不知道这样说对不对，或者可不可以理解？：）

1、我一般做Hela都是1×10～5量铺的板，吹细胞就用直头吸管，轻微的吹吸二三十下，一般来说，加一块板的过程中细胞还是挺均匀的
2、药物颜色我认为对结果没什么影响的，最后吸干净是一样的
3、最好不要用覆板法倒液体，细胞有可能会倾出，而且不容易倒干净，对于有颜色的药物实验来说就肯定影响结果了
4、DMSO，应该没什么关系，我以前用的进口的，现在用的国产的。颜色确实存在不同，进口的稍黄一些，气味也较重

最后要说，MTT实验本来就是精确度不高的实验，大家只有细化自己的每一步，减少操作误差，才能提高实验的准确性了，祝大家都实验顺利吧～～
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-8-14 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上的意见,我前天按前辈的说法加细胞前提前把96孔板放到温箱里了,加完后左右上下晃了3下,然后静置,今天镜下观察还可以呵呵,比以前好多了,细胞也没有集中在四周或是中间,虽然还没有出结果可是觉得铺的应该比较均匀,(我是做72h)的,只是最后我们加mtt是不把里面的培养基和药吸出来的饿,(其中是100ul细胞悬液,100ul药,加50ulmtt)这样我最后家DMSO之前就有250ul的液体在孔里了,我门的枪是200的 我想不出除了倒还有什么办法把液体弄出来呢?要不吸两次?
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-8-14 12:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如果你觉得细胞铺板不过均匀，你不妨用枪头稍微吹打几下，个人觉得效果还不错！
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-8-14 12:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一共就100ul,不敢吹了呵呵,不过我现在的主要问题是怎么把液体弄出来呢?
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caihong[使用道具]
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发表于 2012-8-14 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我自己还总结一个小窍门，就是如果你是横着加细胞的话，不妨试着竖着加药，至于为什么，你动脑筋想一想吧。

实在不明白这横竖是什么意思，望赐教！
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jujuba[使用道具]
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发表于 2012-8-14 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得不管是96孔板还是24孔板,加细胞悬液以前最好还是加一点培养液进去,能盖住底部就好,这样效果会好一点
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乌贼老弟[使用道具]
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发表于 2012-8-14 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对不起，我没有说清楚，应该说每一横排从左到右的顺序加细胞悬液，加受试物是 每一竖排从上到下的顺序。希望这次表达清楚拉。原因是加细胞悬液时，随着时间的延长，细胞要下沉的，密度不可能绝对的均匀，如果加了5横排的细胞悬液，很有可能最后一横排要比第一排细胞数目要多，如果再一横排一横排的加受试物，可能不能表现正常的结果，如果竖排加受试物的话，因为要求均值，影响相对的会缩小。
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-8-14 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上群友的解释,今天我的MTT结果出来了,,这次按照各位大侠的指点细胞是比较韵了,可是我的细胞数铺少了以前我们都是做4天,这次我铺了3*10的4,下午5点种的细胞,第三天早上就加MTT了,(也就是说不到72小时,差了7,8个小时) ,结果我的对照才长到0.7-0.8的样子,真是气四我了!!也不知道是不是我的细胞状态不行啊,长这么慢!以前不也长挺快吗,
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