小中大合成培养液的配制re制剂的制备
一、原则：1、暂不用的制剂-20度冰冻（含抗生素），
2、一周内要用的，4度冷藏。
3、一般用三蒸水制备。
4、解冻：
5、双份的思想
一、胎牛血清的准备：零下15度－正4度－室温－56度30分钟灭活。一般已灭菌处理过，不需过滤。
二、合成基本培养液的配制：
1、制备三蒸水
2、加温至15~30度
3、加入干粉，搅之使溶
4、加入NaHCO3(多为2mg?)调节PH值。
5、HEPES少许
6、必要时用1NHCL或1NNaOH调节PH（因滤过时PH可能受影响）
6、加水至最终量
7、以0.22微米以下微孔滤膜滤过消毒。
三、抗生素的配制：
1、青链霉素的配制：
2、庆大霉素的配制：2ml(8万u)庆大加NS至20ml, 抽1ml, 加99mlNS, 制成40u/ml之工作液。或1ml(4万u)庆大加NS至1000ml, 配制好后-20度冰冻。
3、使用前解冻后加。
四、生长培养液的配制：
1、基本培养液（使用前解冻后加） 80% － 90%
2、血清（多为小牛血清，使用前解冻后加）10% － 20%
3、抗生素（青霉素100U/ml和链霉素100ug/ml）（使用前解冻后加）
五、缓冲液的配制：
1、HEPES液：47.6g加三蒸水200ml。
2、D-hanks液：KCL(0.4g/L)、KH2PO4(0.06)、NaCL(8.0)、NaHCO3(0.35) 、Na2HPO4·7H2O(0.06g OR Na2HPO4·12H2O 0.08g)、酚红(0.02)。注：单位(g/L)
3、高温消毒15磅30分钟
4、保存见总原则。
六、胰蛋白酶：
0.25%
过滤。
七、胶原酶I：
2mg/ml
过滤。
