液相色谱

昨天想了个问题，挺纳闷。有机类物质做液相都有个检测波长。那么在固定的波长下，不同杂质的吸收不一样，要是某种杂质的吸收很小或者没有，那岂不是检测值和真实含这种杂质的量不相符吗？刚做了个药品中间体的液相，紫外在208和220nm下有最大吸收。可220下做的主峰是99.37%，208下就是 97.2%了。而且同样进样量条件下，在208nm下主峰面积比220nm小很多，但杂质面积却大了。不知道咋回事？那这样的话应该怎么确定波长？或者其中的杂质含量到底以哪个为准？求高人指点,感激不尽！

如果你弄明白你做这项测试的目的是什么，以及这种方法存在的局限是什么和能得出什么结论，你就不会纳闷了。
当然用HPLC一般我们都想看一下相关物质的纯度。如果我们想精确地知道其含量，必需有标品，只要将样品溶于（能够完全溶解标品）适当的溶剂，在标品最大吸收波长，用外标法，得出的数据就可以认为是真实的含量。
如果没有标品，我们用面积归一法（一般甚至不知道校正因子），在相关物质的最大吸收峰处做检测，就能知道它最多含多少了。如果来个全波长扫描，我们又可以知道它至少含有几种物质了。
这下你明白了吗？方法是由人设计的，关键看你想知道什么。如果条件有限，那就要明白你用的方法能让你知道什么了！

定量应采用内标或外标等方法，不能用面积归一化法
波长应选220，在208下干扰峰多

杂质面积大了，说明杂质在208nm下吸收严重啊！
既然220好，当然用220啊，实际你这也是一个方法优化的过程哦！

常用452nmz作为通用检测波长。
看你要的目标组分的最大吸收波长，也可以以此波长作为检测波长。
有的组分，如果没有共轭体系，在紫外不出峰，这是dad检测器的弊端。