[求助]细胞污染的原因。 - 经验共享

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标题:[求助]细胞污染的原因。

园丁##[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

支原体属于没有细胞壁的一类特殊的细菌，由于其柔韧性，支原体能通过0.45um的过滤器。支愿体生长比细菌缓慢，需要1~3小时甚至更长。同时支原体生长有一个较长的平台期，因此可能需要1星期才能发现明显的污染现象。大多数mycoplasma帖附在细胞壁上生长，但也有少数能穿透细胞膜进入细胞生长。由于细胞培养过程中P/S的广泛使用，常使支原体污染被抑制而不是完全消灭，这种在显微镜下看不见的污染现象同样是危险的。更可怕的是，支原体在液氮中无需保护也能生存，因此有人将细胞保存在液氮的气相中。
细胞培养过程中支原体污染的来源见下表：
Table2 . Sources of mycoplasma contamination
• Original (primary) tissue isolate (<1%)
• Culture reagents (predominantly fetal bovine serum) 目前较少见
• Laboratory staff 常见（大部分细胞污染的支原体是人的寄生菌）
• Cross-contamination from infected cultures 最常见,实验室中发现的支原体污染常是同一种类
当处理已经被支原体污染的细胞时，操作过程中产生的微小液滴是污染的主要来源。这个难以避免的污染源将污染培养瓶、培养液和环境，从而使其他未受污染的细胞发生交叉污染。其次，研究人员口腔中的支原体飞溅也是重要的污染源。
支原体污染后对细胞的影响非常广泛，细胞生长和大多数实验数据都将受到影响，部分影响由下表列出。
Table 3. Effects of mycoplasma contamination on cell cultures
• General effects on eukaryotic cells:
– Altered levels of protein, RNA and DNA synthesis
– Alteration of cellular metabolism
– Induction of chromosomal aberrations (numerical and structural alterations)
– Change in cell membrane composition (surface antigen and receptor expression)
– Alteration of cellular morphology
– Induction (or inhibition) of lymphocyte activation
– Induction (or suppression) of cytokine expression
– Increase (or decrease) of virus propagation
– Interference with various biochemical and biological assays
– Influence on signal transduction
– Promotion of cellular transformation
– Alteration of proliferation characteristics (growth, viability)
– Total culture degeneration and loss
支原体污染的常见表型有：细胞生长变慢、细胞活力下降、贴壁细胞漂起、出现许多黑色小颗粒。

园丁##[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

支原体菌株来源：M.Arginini ATCC23838 精氨酸支原体,M.FermentaneATCC19989发酵支原体 ,M.SalivariumATCC23064唾液支原体 ,M.HominisATCC23114人型支原体 ,M.OraleATCC23714口腔支原体 ,M.HyorhinisATCC29052猪鼻支原体。其共同引物序列来自16s和23s保守区域，外部引物为Ｆ1 5′-ＡＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＧＣＴＧＧＴＡＡＴ-3′，Ｒ1 5′-ＧＴＴＣＡＴＣＧＡＣＴＴＴＣＡＧＡＣＣＣＡＡＧＧＣＡＴ-3′；内部引物为Ｆ2 5′-ＧＴＴＣＴＴＴＧＡＡＡＡＣＴＧＡＡＴ-3′，Ｒ2 5′-ＧＣＡＴＣＣＡＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＴ-3′。

kulee[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的细胞也是同病相连啊!

yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

革兰氏阳性菌，比如金黄色葡萄球菌天然对青霉素就有抗药性，加双抗是没有用的呀！

克隆鱼[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

太感谢了！
很可能是感染支原体，因为我的培养液+胰酶是在培养箱放了1周才浑浊的。
因为积分不够，自己的帖子看不到回复，郁闷.....

is2011[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的细胞也是支原体污染，表现和各位讨论的很相似。因为是国内建系的，比较便宜，就重新买了一株，结果，买回来就是细胞之间有黑粒，而且感觉细胞表面粗糙。查资料时发现书上说世界上30－50％的细胞都存在支原体污染。而我们这里大家许多人都拿着半死不活的细胞在继续试验，唉！真的有防不胜防的感觉。各位还有什么高招吗？

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发表于 2012-8-31 16:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

细菌污染拉，应该时培养箱的问题，好好清洁一下，还有最好把细胞培养实验室整个清洁。

hulu呼噜[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的细胞也碰到污染问题，前后两次正好相隔一个月。第一次培养无菌生长，那时刚开始养细胞不到一个月，给师姐一吼都蒙掉了，现在也想不起是什么样的表现了。这一次有经验了，低倍镜下见培养基中漂浮着云雾状的小颗粒，摇动培养皿看得更明显。200倍下看，细胞上贴了一层黑黑的颗粒，没有见到会乱窜的细菌。培养结果是“嗜麦牙寡氧单胞菌”，用CIFRAN（悉复欢，临床所用针剂）10微克/毫升的终浓度，处理后未见同样的污染。
细胞污染是大问题。现在细胞虽然抢救回来了，但状态并不好。

nn255[使用道具]
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发表于 2012-8-31 16:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我实验也出现一片沙子一样的东西，怀疑是支原体污染，用Roche的试剂处理没有效果，后来发现用胰酶消化可以将大量的颗粒消化下来，然后继续培养，可以减轻症状，细胞生长好一些，建议如果细胞珍贵，可以考虑这个做法吧，但首先你的细胞不是那么容易消化下来的那种

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