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标题:[求助]如何提取细胞的上清?

star#room[使用道具]
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谢谢大家的帮助!
还想请教大家上清的蛋白如何浓缩呢?具体常用的有哪些方法呢?其价格分别如何呢?有没有比较操作方便,简单价格又比较便宜的方法?(就是那种性价比好的)
再次谢谢大家了!
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loli[使用道具]
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楼站友帖子的内容就是一种蛋白浓缩试剂盒,具体你可找该站友问问.
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园丁##[使用道具]
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其实这个问题很简单。你收集细胞上清的目的是要测定上清中蛋白的活性。你依然可采用常规蛋白的一些方法。其中稍微改变就行了
1、收集细胞上清,可通过透析浓缩或者PEG6000沉淀浓缩,因为你的蛋白含量肯定低,所以第一步是要富集蛋白,便于纯化收集。
2、当浓缩后,就是纯化蛋白,可通过柱层析纯化,或硫酸铵沉淀纯化,以前者较好。
3、检测活性。

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你要检测含量,有ELISA就好呀,反正你的蛋白是抗体嘛。要是提取的话最好用rProteinA柱子,亲和层析效率特别高,既可富集又可纯化,经这一步后,蛋白纯度就能到90%以上。
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