细胞世界

心肌细胞很脆弱，分离步骤尽量要小心，稍微有点剧烈很可能造成细胞死亡。
烧杯里的水可以少放一点，但是要不断补充热水进去，并且吸出一些水，以防水太多，锥形瓶漂起来。最好用个温度计看着水温，一般35－37度，千万别超过37度。摇床我试过，效果很差，因为是空气加热，可能液体升温很慢。
离心时间可以长一些，但是转速最好在1000r/min以下。离心下来的絮状东西，可能是吸液体时把未消化完全的组织吸出来了，这个影响不大，换液就没了。每次吹打完后，静置一分钟左右，这样组织沉下去，吸取上清就不大会把组织吸起来了。吸的时候轻一点。

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谢谢！我按你的方法再试试吧。对了，你一直都是用胰酶消化吗？试过胶原酶吗？哪个效果更好呢？希望能指教。能和你联系吗？

乳鼠心肌细胞消化都是用胰酶的，胶原酶是用来消化成年大鼠心脏的

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我感觉这是误导，用胶原酶消化的乳鼠心急细胞的质量比单纯胰蛋白酶消化的质量要好的多，根本没有胶原酶只用来消化成年大鼠心脏的说法。消化乳鼠心脏本来有三种方法：胰蛋白酶法，胶原酶法和EGTA法，或者三者中两两相配。

关于转速的问题在消化过程中不是很严格，我们实验室没有磁力搅拌器，每次都是在37度的温箱中用手摇晃的，胰蛋白酶的浓度和你所用的厂家的酶的单位有关，不是说别人的浓度一定适合你的，具体是用胶原酶还是用胰蛋白酶还是两者和用和你自己的经济条件和实验目的有关，用胶原酶消化的细胞质量的确是比较好的，就是胶原酶比蛋白酶贵。细胞培养本来是很简单的事情。
其实细胞培养不贴壁的问题无非是三个原因：
1.所用的贴壁的器皿，比如培养瓶的干净程度，材料。处理不好的贴壁容器细胞不会贴的，只要消化的有细胞，和其他的过程无关，当然前提是酶不能完全把膜破坏的不象样；
2。所用培养基的酸碱度经长时间放置后是否重新调节，所用的培养基中是否补加了长时间放置后需要补加的成分；
3，最重要的一点是所用的血清的浓度和质量，如果血清成分特别好，如果是国产的，一定用肽牛血清，排除了以上的原因，没有理由细胞不贴壁的。我这样培养的细胞可以用来做膜片钳的！
望好好考虑以上原因，应该可以很顺利的，祝好运！

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谢谢!不过我也用过胶原酶,但是细胞没有贴壁.培养基用前我也补加了谷氨酰胺,还有什么需要加的吗?血清我是用的国内的胎牛血清,15%的.膜被破坏了是什么样子啊?是细胞破碎吗?胶原酶也会损伤细胞吗?

我最近刚开始养乳鼠心肌细胞，想请教一下高手们就是乳鼠心肌细胞消化可以用CO2培养箱吗，还有就是在消化过程中摇晃是不是很重要，我们实验室由于比较匮乏，我都是把它直接放在培养箱中消化10分钟左右拿出来，中间没有摇晃，做了几次老是没有细胞，心中很郁闷，不知道什么原因，还有用一次性的培养瓶培养是否需要铺板，希望园内的前辈们能给我帮助，心中很急，谢谢大家。

你好，看到你培养的细胞很成功了，心里非常羡慕，我最近做了几次心肌细胞培养，可都看不到细胞，也不知道什么原因，想请教您，消化的时候是在无菌环境中还是一般的环镜中，我们实验室资源有限，没有磁力搅拌器什么的，所以我是把它放在培养箱里消化的，中间也没摇晃过，从放进去到拿出来在加上处理差不多得十多分钟，消化过程中是不是摇晃很重要啊？消化后的上清液我最后一起离心的，中间也没有放在冰台上操作，离心的最后离心出的东西很少，不知道什么原因，心里很着急，希望您能够提点建议，非常感谢。