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标题:【讨论帖】骨骼肌卫星细胞培养

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刚分离出来的骨骼肌呈圆形,折光性较强,首次换液可在三天后进行--------------------3天?我分离后要是等3天后换液,我的培养瓶里面就会铺上一成厚厚的絮状沉淀!而且培养基就会变成很黄的颜色!
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ritou1985[使用道具]
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最近一直在看文献,发现不管中文还是英文文献,在骨骼肌细胞的用词上往往给人一种混淆的感觉。例如中文:成肌细胞和肌卫星细胞是否是同一概念,英文中myoblast与satellite cell是否为同一概念,myogenic cell、muscle derived cell等也是经常使用的单词,具体含义是什么,我觉得有必要予以探讨。

已查到实验室常用大鼠成肌细胞株为L6细胞,其来源、细胞特性、培养特性如何,体内注射后是否能逃避宿主的免疫排斥,能否长期存活?

同时希望希望 战友在骨骼肌卫星细胞原代分离、培养的细节方面给予具体的指导。
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xueyouzhang[使用道具]
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我分离培养卫星细胞的方法如下,愿与大家共同学习。
取3日龄SD大鼠,无菌条件下取四肢骨骼肌组织,用Hanks液冲洗血液,剪碎后加入0.5%胶原酶II 4mL,0.1%透明质酸酶4mL,37℃消化20 min。用吸管吹打,200目尼龙网过滤组织碎片,1 000 r/min离心清洗3次,去上清。加入1%链酶蛋白酶(pronase)37℃消化20min以释放卫星细胞,加入带血清的M199终止消化。在离心管中加入2mL 60% Percoll,2mL 20% Percoll,缓慢加入2mL细胞液,800g 离心20min,取60% Percoll与20% Percoll分界面处的细胞,用无血清培养基1 000 r/min离心清洗3次,记数,接种于培养瓶中37℃,5% CO2 培养。细胞平均72h传代一次。
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成肌细胞株为L6细胞,请问哪里有卖的?
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:你的细胞会不会是被污染了啊,我没碰到过这种情况,经验不够,还是请高手指点一下吧.
血细胞也是不贴壁的,换液时也能去除啊
我前两天刚照了一下照片,但不小心给曝光了,下次再照吧,有机会再传上来
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发一张肌卫星细胞HE染色照片


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再传一张分化融合为肌管的照片


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你的细胞会不会是被污染了啊,我没碰到过这种情况,经验不够,还是请高手指点一下吧.
血细胞也是不贴壁的,换液时也能去除啊
我前两天刚照了一下照片,但不小心给曝光了,下次再照吧,有机会再传上来

————————————————————————

是啊,我也是认为被污染了!
我发现养原代很烦啊!我实验一直进展不顺利!
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成肌细胞、肌卫星细胞和肌肉干细胞
成肌细胞是指胞浆中含有肌丝的肌组织前体细胞。心肌、平滑肌及骨骼肌在胚胎发育中,都经历了由间充质细胞分化为成肌细胞,再分化为成熟肌细胞的过程。一般认为,成熟个体的心肌和平滑肌组织不含成肌细胞,而骨骼肌组织中成肌细胞是以肌卫星细胞的形式存在。肌卫星细胞位于肌纤维的肌膜与基底膜之间。一旦骨骼肌受损,卫星细胞就会被激活,大量分裂、增殖,相互融合形成再生肌纤维。
1. 骨骼肌组织中成肌细胞是以肌卫星细胞的形式存在
2. 正常是参与骨骼肌损伤修复的成肌细胞就是卫星细胞
3. 有一类干细胞为单能干细胞,这类干细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化,如上皮组织基底层的干细胞、肌肉中的成肌细胞或叫卫星细胞。
4. 根据损伤骨骼肌激活肌卫星细胞的原理,采取刺激成年大鼠及猴骨骼肌的方法,将骨骼肌卫星细胞激活为成肌细胞
5. 正常情况下,骨骼肌卫星细胞具有一定分裂、增殖能力,卫星细胞的数目不会 随时间增加 而增加。因为分裂产生的成肌细胞会融合入邻近的肌纤维中,使肌纤维细胞核增加,可达数 百个,同时使肌纤维增粗、变长,完成肌纤维的发育
----------------
以上都是列举的文献中的知识点,我想请问大家一个小问题:
成肌细胞、肌卫星细胞到底是什么关系?从1.2.3可以看出其实肌卫星细胞就是成肌细胞。但是4.5却可以说成肌细胞是肌卫星细胞分化来的。而且我在外文相关网站和文献上看到肌卫星细胞可以分化成成肌细胞(有图看到成肌细胞和肌卫星细胞的大小形状不一样)。但是亦有人说成肌细胞=肌卫星细胞。是不是成肌细胞是肌卫星细胞在某种情况增殖的一个阶段性产物?有研究者是培养成肌细胞,有的是肌卫星细胞?
哈,小弟对细胞知识了解不多,还望各位战友赐教!

好像肌卫星细胞就是成年期的成肌细胞,是不是啊?
我想肯定一下
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询问大家一些信息:
大家培养细胞时用的 国产的 离心管等 一些小东西是那家公司的?
还有 细胞筛 我找了很多公司都没有找到啊~!
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