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标题:【讨论帖】骨骼肌卫星细胞培养

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不客气!

我也准备做结蛋白(desmin)免疫细胞化学染色(ABC法吧?)
到时候在请教!
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最近我又做了一次
发现纯化是不是很难啊?
我头天晚上接的种,第2天换的液
结果我发现长满了 成纤维细胞!
我差速了50分钟
明天再看结果! 希望ing.........
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看来你的细胞的数量还是很多的呀,第二天就长满了,但你怎么确定那些就是成纤维细胞呢
有文献做过差速贴壁18个小时的,还有时间更长的,那样会更纯一些。【Development of Approaches to Improve Cell Survival in Myoblast Transfer Therapy 。Zhuqing Qu等1998年】
你用的是什么培养基呢,建议你用F-10,文献上讲在这种培养基里成肌细胞生长占优势,成纤维细胞不占优势【Primary Mouse Myoblast Purification Characterization and Transplantation for Cell-mediated Gene Therapy Thomas A.Rando,1994】
再还有一个方法:不要管它,让它长去吧,消化传代的时候再差速贴壁一下,效果应该会好些。
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因为我不确定接种的密度,只是凭自己的一些感觉接的种。
而且我怕接种太多之后弟二天培养液变浑浊(我以前就有这种现象),里面有很多杂细胞和死细胞,组织碎片什么的。
头天晚上接的种,我第二天来看时,还是有一些浑浊(不是污染),于是我换了液(我想这会损失很多的卫星细胞吧?),张到2-3天基本就长满了,我怎么确定那些就是成纤维细胞呢?因为我们这里有老鼠的成纤维细胞系,我看过其细胞形态什么的跟我的一样。当然2-3天张满的细胞里面肯定有一部分是卫星细胞。于是我就用消化传代差速贴壁法。

我差速贴壁用的是1个小时,不知道太长还是太短(1个小时后看成纤维细胞很多都贴壁了)。
培养基我用的是F-12(我分离的方法是参考“猪骨骼肌卫星细胞的离体培养及其调控的研究”上的)
我培养基里面没有鸡胚提取物,所以可能卫星细胞贴壁很慢(因为即使过夜培养,里面还是有很多择光性很强的小亮点(应该是细胞吧)存在,所以我觉得纯化可能不大好做)。

而我有一个同学他分离后第一次接种就不管他了(他3天都不换液),然后用2小时差速来纯化细胞。
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最近一直在看文献,发现不管中文还是英文文献,在骨骼肌细胞的用词上往往给人一种混淆的感觉。例如中文:成肌细胞和肌卫星细胞是否是同一概念,英文中myoblast与satellite cell是否为同一概念,myogenic cell、muscle derived cell等也是经常使用的单词,具体含义是什么,我觉得有必要予以探讨。

——————————————————————————————

是啊,我也有同感! 其实很早以前我也就这个问题发过贴子了:
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=2697533&sty=1')
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成纤维细胞
大家可以当作是与骨骼肌细胞的对照了
还比较典型吧
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dragonkilly[使用道具]
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我在培养猪的成肌细胞,那位有经验,交流一下。
用哪种酶消化好,时间多长。是否必须添加鸡胚提取液。
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气泡[使用道具]
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鸡胚提取液最好是加了
经验吧
不过我一直都没有买到!
打算自己做了
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shenkunjie[使用道具]
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我想请问各位高手,我的细胞是L6。它在ATCC上面好象是称为myoblasts,如果用这种细胞作为转染靶细胞,是否需要让它培养成myotube才可以转染呀(我是要模仿离体骨骼肌的一些特征)。但是myoblasts和myotube是什么形态我也不知道。在由myoblasts变成myotube时候需要加入刺激剂吗还是直接用普通培养基就可以了?
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ququer787[使用道具]
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非常感谢!我最近也碰上了个大问题,做了好几次都不成功,消化时间不好掌握,请各位兄台帮帮忙。小弟感激不尽!
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