小中大因为我不确定接种的密度,只是凭自己的一些感觉接的种。
而且我怕接种太多之后弟二天培养液变浑浊(我以前就有这种现象),里面有很多杂细胞和死细胞,组织碎片什么的。
头天晚上接的种,我第二天来看时,还是有一些浑浊(不是污染),于是我换了液(我想这会损失很多的卫星细胞吧?),张到2-3天基本就长满了,我怎么确定那些就是成纤维细胞呢?因为我们这里有老鼠的成纤维细胞系,我看过其细胞形态什么的跟我的一样。当然2-3天张满的细胞里面肯定有一部分是卫星细胞。于是我就用消化传代差速贴壁法。
我差速贴壁用的是1个小时,不知道太长还是太短(1个小时后看成纤维细胞很多都贴壁了)。
培养基我用的是F-12(我分离的方法是参考“猪骨骼肌卫星细胞的离体培养及其调控的研究”上的)
我培养基里面没有鸡胚提取物,所以可能卫星细胞贴壁很慢(因为即使过夜培养,里面还是有很多择光性很强的小亮点(应该是细胞吧)存在,所以我觉得纯化可能不大好做)。
而我有一个同学他分离后第一次接种就不管他了(他3天都不换液),然后用2小时差速来纯化细胞。