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标题:【讨论帖】骨骼肌卫星细胞培养

star#room[使用道具]
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发表于 2012-9-10 13:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Down 了一篇好东东，希望对大家有用。

Chapter 1: C. Rehfeldt, I. Fiedler, and N.C. Stickland. Number and size of muscle fibres in relation to meat production. In: Muscle Development of Livestock Animals - Physiology, Genetics, and Meat Quality (Editors, M.F.W. te Pas, M.E. Everts, and H.P. Haagsman). CABI publishers, Wallingford, Oxfordshire, UK, 2004.
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2012-9-10 13:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位好!我刚刚要开始培养骨骼肌细胞,请多多指教.
请问percoll哪个厂家有卖啊?我定了一个厂家,她们给我拿的淋巴细胞分离液.二者不是一回事吧?还有鸡胚提取液,哪里有卖呢?谢谢!!
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发表于 2012-9-10 13:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家好，辛苦了
我也做骨骼肌卫星细胞
想请教以下：
各位用的消化酶的用量具体是多少？
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发表于 2012-9-10 13:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在跟着师姐培养兔骨骼肌卫星细胞,她是采用的组织块法,不用酶消化,直接接种到一次性培养瓶中,大约5-6天开始有卫星细胞从部分组织块周围长出,但量很少,12天左右长出细胞的组织块周围已经有大量的细胞,非常密集,同一方向排列,但没有长出细胞的组织块周围就一片空白,如果这样的话,应该什么时候传代呢,这样下去是不可能扑满瓶底的啊,而且我们的细胞是用于心肌移植的,一定要传代才能进一步纯化和增加数量,请高手指教,谢谢
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我佛慈悲[使用道具]
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发表于 2012-9-10 13:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也做L6细胞,但是诱导比较难,有的能诱导,有的就不好诱导.不是很稳定.
做传代是一定不能让细胞长的过密了,不能超过70%
不知道这次从上海细胞库买的L6会怎样.难啊,老板又叫我做原代,看起来更不容易啊
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发表于 2012-9-10 13:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
骨骼肌卫星细胞培养互助小组成立了，请支持！
由于课题关系要养骨骼肌卫星细胞.

骨骼肌组织中的成肌细胞主要以骨骼肌卫星细胞的形式出现。骨骼肌卫星细胞是骨骼肌中位于肌细胞膜和基膜之间的具有增殖分化潜力的肌源性细胞，其被激活后，与成肌细胞一样具有增殖分化、融合成肌管、再形成肌细胞的能力。离体培养肌卫星细胞是研究肌细胞生长发育规律、了解肌细胞形态结构变化以及进行肌肉生长发育相关基因功能研究的重要手段。骨骼肌卫星细胞最早从大鼠骨骼肌中分离出来，如今在人、鸡、羊、牛及猪等物种上都已成功分离出骨骼肌卫星细胞，并进行体外培养。

我是采用胶原酶消化法，从肌肉组织中分离骨骼肌卫星细胞。我已经用小鼠试了一下，结果不好。应该是我的技术不过关，而且采取的小鼠骨骼肌样太少了。
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发表于 2012-9-10 13:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位楼上的同志，我最近也是培养SD大鼠卫星细胞，但是开始比较郁闷。

我使用的生长培养基是F10、20%的胎牛血清、1％鸡胚提取液、1％双抗；在换生长培养基之后发现细胞死的较多，有较多的细胞在帖壁后仍然死去。各位是否知道原因？

我开始配制F10时，调好了PH值在7.2左右，然后滤膜过滤除菌。第一次培养当我加进去以后，细胞全死了，我测培养基PH值，竟然达到了8左右。细胞肯定会死去。第二次培养，我加无菌盐酸将生长培养基的PH调到7.3左右，这次细胞没有像上次那样死的那么快，但是死的较多。

是不是F10的营养不如DMEM丰富，而使细胞较多的死亡？

很着急等待！
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发表于 2012-9-10 13:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家都用胶原铺板 么？听说做原代都要用的啊
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发表于 2012-9-10 13:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家在取肌肉组织的时候，有什么心得体会？如果取的组织中不是很纯，那么杂细胞是不是很容易就疯长起来，而我们要得细胞就长不起来了？我同学是用解剖镜下操作的。
我做原代的时候总是容易出现污染，怎么办啊，大家有没有好的建议？
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小螺号[使用道具]
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发表于 2012-9-10 13:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你解剖的时候小心一点，剪刀一定要注意消毒，象放入酒精中一会，然后用火烧，所以解剖的时候可以在旁边放一个酒精灯。另外大鼠你可以直接放入酒精中消毒2分钟左右，主要是防止鼠毛沾染，在解剖肌肉的时候也需要特别注意鼠毛的沾染。解剖下来的肌肉用无菌PBS充分冲洗。总之一切步骤你都要考虑，因为它们都会引起污染。我开始做的时候也是经常污染，现在基本可以避免。
祝你好运！
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