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标题:【讨论帖】骨髓间质细胞培养互助

is2011[使用道具]
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发表于 2012-9-12 12:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教哪位仁兄能够提供给小弟pittenger等1999年发表的关于培养间充质干细胞的文章？我在pubmed和ovid上都查不到原文，很急！！谢谢！
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阿敏[使用道具]
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发表于 2012-9-12 12:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

骨髓间质细胞、骨髓间充质干、细胞骨髓基质细胞这三种细胞到底怎么定义？
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c86v[使用道具]
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发表于 2012-9-12 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在养骨髓基质细胞，你们觉得这种细胞原代和传代培养时形态改变大吗？原代培养时一般成梭形，像成纤维细胞，但传代后，细胞伸展开，体形变得较大，生长速度也减慢，这是正常现象吗？

我猜你养的是大鼠的BMSC吧，我养的时候也遇到这个问题，可能与原代培养时BMSC较少，换液几次后没有达到汇合就传代有关，不过等养到第3代以后会好一些。另外与培养基也有关系：用胎牛血清和低糖DMEM效果要比小牛血清高糖的DMEM好。兔子和犬的细胞就很规整，基本一直是梭形的，漩涡状编织状排列。
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发表于 2012-9-12 12:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
骨髓间质细胞、骨髓间充质干、细胞骨髓基质细胞这三种细胞到底怎么定义？

————————————————————————————————————

根據我所了解這三個名稱都是蔣同一種細胞.只是英文翻譯成中文上的差異.
有錯請訂正.....
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tie8[使用道具]
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发表于 2012-9-12 12:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的是进口的corning塑料瓶，效果超好，一分价钱一分货，国产的玻璃瓶不好用，实在不行用下列办法改进后也能凑合，多养几次细胞后，瓶子别洗，瓶子的底部会附着很多细胞生长时分泌的生长因子，极大的促进细胞生长，美．．．．就一个字了，让你都来不及就张满了．

————————————————————————————————————————————

這不是錢的問題.是骨髓間質幹細胞對塑膠表面有貼附的特性.所以玻璃瓶的效果會比較差.......
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发表于 2012-9-12 12:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在养骨髓基质细胞，你们觉得这种细胞原代和传代培养时形态改变大吗？原代培养时一般成梭形，像成纤维细胞，但传代后，细胞伸展开，体形变得较大，生长速度也减慢，这是正常现象吗？

——————————————————————————————————

我认为传代培养后其成纤维形的特征更明显，有时候会成旋涡状
细胞体积变大，伸展开可能是因为传代的时候密度偏低造成的
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tie8[使用道具]
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发表于 2012-9-12 12:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教有养过小鼠的MSC的前辈吗？我养第一次用的是全骨髓培养，看得介绍说要多贴几天，我就原代5天换液贴的倒是不少不过什么样的都有！细胞很杂，我看都快满了，就准备传代可是怎么也消化不下来！吹打后下来了些，可是贴壁的和MSC的形态差太远了我就扔了。我想可能是贴壁时间太长杂细胞太多的缘故。第二次，做的2瓶一个是24小时头次换液，一个是48小时头次换液，杂细胞少了很多形态也不错特别是24小时的，有好多梭形的成一条线一样生长得，可是今天一消化还是下不来啊！有没有遇见过这种情况的前辈啊！
注：胰酶没问题（同时消化过别的细胞），培养用低糖DEME10%FBS除青连霉素，谷氨酰胺，不加其它成分。
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发表于 2012-9-12 12:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想请教一个问题，传代时加入胰酶后，在镜下看到细胞开始收缩变圆就加入培养液终止，还是等到大部分的细胞都变圆了呢？昨天我在传代时是见多数细胞变圆脱落后加的，时间也就在三到五分吧。但是今天看到细胞中有空泡出现，是不是消化时间久了？
请各位前辈指教了,谢谢
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发表于 2012-9-12 12:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想请教一个问题，传代时加入胰酶后，在镜下看到细胞开始收缩变圆就加入培养液终止，还是等到大部分的细胞都变圆了呢？昨天我在传代时是见多数细胞变圆脱落后加的，时间也就在三到五分吧。但是今天看到细胞中有空泡出现，是不是消化时间久了？
请各位前辈指教了,谢谢

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个人意见：估计不是，3-5分钟不长，原因可能是你把死细胞也消化下来了吧。看看空泡贴壁吗？不贴的话下次换液洗掉就没事了。
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8s5g[使用道具]
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发表于 2012-9-12 12:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那些含空泡状的细胞贴壁，是第一次传代，0.25%胰酶+0.02%EDTA消化，发张照片，请各位帮忙分析一下，谢谢。
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