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M SC 体外培养的研究已进行30 余年, 取得了很大的进展, 但由于其本身的研究还不系统全面, 仍处于探索阶段, 有些问题亟待解决。 (1)M SC 培养过程中的异质性, 影响了干细胞分离纯化的效果。如何有效地获得大量同质性的M SC, 有待于对其细胞学特点和异质细胞群中各类细胞标志物的进一步研究。 ( 2) 对M SC 在细胞工程和组织工程方面的利用研究, 都希望得到大量的未分化干细胞成分。理论上讲, 在体外设法诱导或用外源基因导入等技术, 可使干细胞实行对称性有丝分裂, 无限扩增而不分化,但其结果是细胞形态和生理可能发生改变[ 14 ]。条件生化基因的引入或许会克服这一困难。1998 年,H icok[ 23 ]将SV 40 的变异型温敏基因t sA 58导入M SC, 形成了细胞的条件永生化, 即在34℃环境下, 细胞能持续增殖, 分化受到抑制; 在39. 5℃环境下, 细胞增殖减慢, 出现分化, 且在不同的诱导条件下, 或表达成骨标记, 或表达成脂标记。但是, 长期培养发现这些细胞并不能保留其分化能力, 可能是细胞生化的逆转受到了抑制。如何避免扩增的干细胞朝多方向分化, 仍有待于研究。 ( 3) 基因转染的M SC 的培养为我们获取纯的干细胞提供了新的空间, 但转染的外源基因是否会影响M SC 的分化潜能, 纯化后的M SC 长期传代能力如何, 目前尚存争议。Kitano [ 12 ]在实验中发现原代培养的细胞分化潜能下降、传代培养所形成的克隆数减少。而O reffo [ 15 ]在体外长期培养(> 9 月) 基因转染的M SC, 发现其仍具有良好的分化潜能, 注入鼠皮下后, 可在骨组织中检测到含有标记基因的M SC, 并最终分化为成骨细胞。另外, 如何提高基因转染效率也是一个长期困绕人们的问题。尽管如此, 由于M SC 具有公认的多向分化性,被认为是一种理想的细胞治疗和基因治疗的靶细胞, 相信随着研究的进一步深入, 一定会为其临床应用带来新的前景。
