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标题:【分享帖】提醒有关购买国外细胞株应该注意的事项!

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如果细胞运来后,应该马上进行复苏,复苏时,迅速投入37摄氏度水浴中并不断振摇,使之迅速融化,离心应在1000转/分以下,如果太高速会使本来脆弱的细胞产生较多的碎片,培养过程中,甚至会因为碎片而出现黑点(一般都是800r/min,5min),弃上清液,以去除二甲基亚砜。加入先前配好的培养基,并在50ml培养瓶中进行培养。
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iclc cell lines quality control:
Quality control: sterility

The cell lines are grown in antibiotic free medium for at least two passages in the quarantine area. Three methods are used to detect mycoplasma infection: DNA staining by Hoechst 33258, PCR amplification and MycoTect assay

DNA staining
The fluorochrome bisbenzimide (Hoechst 33258) binds specifically to the Adenine-Thymine (A-T) regions of DNA. Uninfected cell cultures observed under fluorescence microscopy (image on the left) are seen as fluoresceing nuclei against a negative background; cultures contaminated with mycoplasma (image on the right) appear as brightly fluorescent uniformly shaped bodies surrounding the cells, or as small clusters between the cells.
Artifacts may be fluorescent and interfere with the interpretation of results, but they will appear larger in size than mycoplasma and irregular in shape. The main advantages of this staining method are the speed at which results are obtained and the fact that non-cultivable M. hyorhinis strains can be detected.


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Identification of cell lines
Species confirmation
The species of origin of animal cell lines is determined or confirmed by isoenzyme analysis (AuthentiKit TM System, Innovative Chemistry). The electrophoretic mobility of at least two different isoenzymes from a panel of seven (AST, G6PD, LD, MD, MPI, NP, and Pep  is determined for each cell line. Recently, Banca Cellule has published a PCR-based method for easily identifying or confirming the species of origin of cell lines by using a panel of oligonucleotides specific for the nine animal species most common in cell culture laboratories (human, cat, dog, mouse, rat, horse, rabbit, African Green monkey and Chinese hamster). Furthermore Banca Cellule has developed a multiplex PCR method, which allow for confirmation of the species of a cell line and for identification of a possible inter-species cross-contamination by a single assay.

STR Identification
Recently, the multiplex short tandem repeat (STR) profiling test was developed for identification of human cell lines. Using this approach, a number of STR loci are amplified by means of PCR with a set of primers, and the products are simultaneously analysed with technologies of automated revelation. This results in a numerical line-specific code, extremely reproducible, which will become integral part of the cell line identification code. The STR test was already carried out on a panel of Banca Cellule cell lines, and will be extended to all the human cell lines.
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提醒各位买细胞株的朋友及公司,如欲从国外买细胞株的同时也希望购买同一公司相关的培养基,建议细胞株与培养基分开包装!如果做一包装查出某一产品可能需要退回国外,可能整个包装整批货物都会退回国外,为了避免此种情况的发生,建议分开包装,这样的话细胞株至少可以进到国内!
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首先,您必须在国内申请一张国际信用卡,VISA或者MASTER卡,然后,以此帐号从ATCC公司申请到一个专用的购买帐号,ATCC或在接到申请七个工作日内做出答复!然后您可以通过传真或者电子邮件订购您所需要的产品,到可以代理进出口试剂的这种公司,去为您代理这方面的业务;
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其次,您必须有处理您所购买的细胞株或者菌株的能力,包括实验室的硬件设施和软件条件,如果您购的细胞株或者菌株生物等级为II级的话,那您必须得有II级生物安全柜,对于一些生物等级较高的产品,有些细胞供应公司或者组织还需要有一个严格的审查程序才能同意订购细胞株或者菌株!
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向各位战友推荐上海细胞库,现在ATCC的细胞株在上海细胞库有很多都可以买到!
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各位战友,如果近段时间需要购买国外的细胞株以及其它的试剂,需要预算好您的时间,因为国内与国外的假期冲突,国外要过圣诞,国内要过春节!所以要调整好您的实验时间以及试验计划!
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签于有些细胞库所推荐的培养基,特别是其中的细胞生长因子较难买到,所以有的时候我们必须做好培养基的准备工作,以避免因为培养基不全而倒导细胞株到后无法进行培养,如果您相换用其它的培养基进行培养,除非您以前养过此类细胞!
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欢迎战友们询问相关细胞株购买过程中所遇到的问题!
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