细胞世界

另外我查到的关于胰酶的资料，希望对你有帮助
胰酶作用及溶解的最佳PH是8-9，配制时应将液体调至PH8左右，充分溶解，过滤除菌。过滤后再调至PH7.5，也可不调。有条件的话可以买配制好的胰酶。胰酶会被血清中的蛋白等物质，以及Ca,Mg离子灭活，常温下降解很快，因此注意使用环境和，保存条件。
注意事项：
在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。
胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1.贴壁细胞的消化：
吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
加入少量胰酶细胞消化液，略盖过细胞即可，室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同。
显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。
如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2.组织的消化：
不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。

我在上海中科院细胞库买了小鼠肥大细胞株P815，回来后换自己配置的培养基和血清（1640＋10℅的新生小牛血清＋双抗），两天后细胞的状态很差，很多聚集成团，并且有细胞碎片，在高倍镜下可见很小的游动的悬浮物，体积小于细白碎片。那位大侠赐教，是否是污染了，还是我得培养基有问题？培养基做过无菌试验，未污染。盼回音

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首先，你用的是新生小牛血清，胎牛血清要比小牛血清的营养成分丰富，建议用胎牛血清。其次，血清的品质对细胞非常重要，建议用进口血清，本人的经验是国产血清容易出现你说的”很小的游动的悬浮物”，本人同时用国产血清和进口血清培养不同的细胞株，进口血清没有出现过”很小的游动的悬浮物”，国产血清在细胞状态不好时就出现。再有就是细胞在换培养基时要有一个适应阶段，尤其是你同时换了1640和血清，所以它更不容易适应。细胞复苏时建议用与冻存相同的血清和培养基，否则细胞很难适应。