细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】瞬时转染293T，LIPOFECTAMIN2000效率...

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 17  2/2 ‹‹12
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】瞬时转染293T，LIPOFECTAMIN2000效率...

vcve[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76131
精华 0
积分 743
帖子 1043
信誉分 101
可用分 6126
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
11

发表于 2012-9-15 14:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问,你DNA和cacl2的比例是多少?用磷酸钙转染几孔的?用了多少ug质粒?谢谢.图片好漂亮!
顶部
summerxx[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75852
精华 0
积分 885
帖子 1388
信誉分 101
可用分 7783
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
12

发表于 2012-9-15 14:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 vcve 于 2012-9-15 14:04 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请问,你DNA和cacl2的比例是多少?用磷酸钙转染几孔的?用了多少ug质粒?谢谢.图片好漂亮!

谢谢，我是完全按照分子克隆的protocol做的。我为了节省质粒，就用的60mm的平皿，因为蛋白表达量非常之高，而且细胞疯长，所以也就够用的。比例是10ug dna和31ul 2M CaCl2。要是做蛋白检测，作6孔板也是足够的。
顶部
vcve[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76131
精华 0
积分 743
帖子 1043
信誉分 101
可用分 6126
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
13

发表于 2012-9-15 14:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

钙转的时候,我配的HBS没有调PH,有影响吗?
顶部
xingyi08[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76899
精华 0
积分 496
帖子 671
信誉分 100
可用分 4201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-10
状态 离线
14

发表于 2012-9-15 14:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也准备做293T的瞬时转染,想先请教各位高手一个问题:你们用的质粒如果是自己提取的话,还需要纯化和精确定量吗?用的什么方法?谢谢!
顶部
qhyu[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77304
精华 0
积分 705
帖子 1049
信誉分 100
可用分 6111
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
15

发表于 2012-9-15 14:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

照片很漂亮，如果能把试验的具体详细信息告知就更好了！
我目前也在做磷酸钙转染，效率就很低，几乎观察不到！
希望加强交流，您的质粒在每孔中加多少？以六孔板为例.
谢谢！！
顶部
cxw0000[使用道具]
一级
Rank: 1


UID 415221
精华 0
积分 11
帖子 2
信誉分 0
可用分 10
专家分 0
阅读权限 255
注册 2023-2-20
状态 离线
16

发表于 2023-2-23 14:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问楼主转染的时候293T的密度是多少?有没有图片呀，最近在用lipo3000转染293T，但是一直把握不好细胞密度，转染效率很低
顶部
cxw0000[使用道具]
一级
Rank: 1


UID 415221
精华 0
积分 11
帖子 2
信誉分 0
可用分 10
专家分 0
阅读权限 255
注册 2023-2-20
状态 离线
17

发表于 2023-2-23 14:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问楼主转染的时候293T的密度是多少?有没有图片呀，最近在用lipo3000转染293T，但是一直把握不好细胞密度，转染效率很低
顶部
 17  2/2 ‹‹12