小中大细胞不贴壁我认为原因主要有：脐带本身不新鲜；消化时间过长；培养液的PH值是否处于最佳状态？；培养瓶是否合适？我做HUVEC已经五年了，由于经费所限，我都用0.25%的胰酶消化10min，共消化两次，用RPMI1640，杭州四季清的小牛血清，细胞贴壁也很好。建议你将培养液重新配置，加血清后PH在7.0左右即可。用COSTAR的塑料瓶子，应该没有什么问题的。胶原酶对细胞的伤害极小，不必考虑它的因素。HUVEC很娇贵，建议你把细胞浓度调得大一点，细胞容易成活。一般4小时细胞可以完全贴壁。
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感谢你的帮助，你用杭州四季青的小牛血清培养，在不加生长因子情况下细胞贴壁如何呢？我又作了次对照实验，问题出在血清上，所以我打算换换血清
