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标题:【讨论.精华帖.】细胞培养专区

xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得你需将你具体情况说得更具体点，这样才能针对你的问题提出建议。
我想第一应是无菌（这点就不用说了），第二是加入的浓度是个非常要注意的地方，但不知你的意图不好详细说。
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的人胚肺纤维细胞一买来，用我的培养系统后也出现，死细胞团块，黑色丝状。培基不变浑浊，我想是支原体污染。我用的是杭州四季青的超级小牛血清。细胞慢慢死去，越来越少。这位兄弟的细胞大概也是这种情况。
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的情况是这样的，我在座干细胞的定向分化，想在细胞培养液中加入一种药物（临床上用的），不知剂量如何确定，比如：临床上要求用生理盐水或葡萄糖稀释，按体重使用的，我在细胞培养中怎么办？谢谢！
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发表于 2012-9-19 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Disposable Petri Dish不都是塑料的吗？那怎么灭菌，湿热灭菌不变形吗？

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我为什么推荐使用一次性细菌培养皿呢？其实这是国内供应商对这种培养皿的一个俗称，应该从字面上翻译成“一次性使用培养皿”，也就是“Disposable Petri Dish”。这是没经过组织培养处理过的聚苯乙烯培养皿，买回后自己用聚赖氨酸、明胶、血清处理一下，灭菌后使用，效果不比细胞培养皿差，成本却低了很多。
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caihong[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
“最近我们实验室养的正常肝脏细胞L-02有一个培养瓶里出现许多黑色的颗粒状物质，遍布于细胞间隙和培养基中，细胞也被其覆盖，形态看不清楚，这些黑色颗粒好像贴在瓶壁上一样，非常牢固，细胞生长状态还行，以前有一瓶细胞中也有这种情况，现在这瓶细胞还行，但是这种黑色颗粒状物质到底是什么东西一直弄不清楚，不知大家有没有遇见过这种情况，可否给我指点一下，谢谢。 "

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我也遇到相同问题,细胞被黑色颗粒物质影响到不能贴壁伸展,请有经验的朋友帮忙解决困难!
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kulee[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得应该先查相关文献,根据文献确定浓度或直接向这一领域专家求助,最好是外国人,日本人除外.最不理想的办法是自己摸索.浓度梯度..
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发表于 2012-9-19 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

293细胞转染效率比较高，生长快，有的用。只是经不得震动很是烦人，但是如果生长不是占满空间的话，还是比较好处理的，我自己的感觉是胰酶消化蛮重要，不要浓度太高，浓度较低的消化，在孵箱里宁可多放些时间，待到成流沙状移动时，加血清终止。传代后长的很可爱，最好不要老传代，容易走样。
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发表于 2012-9-19 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在培养草鱼吻端上皮细胞ZC7901细胞系，我们一直用EDTA来消化，但有时单靠EDTA又很难消化，我尝试过加入少量的胰酶，例如当我按0.05%胰酶+0.02%EDTA进行消化，在消化液加入到培养瓶之后，马上出现如流沙般倾下的状况，结果，细胞几乎没有收获到，所以关于要不要加胰酶，加多少，让我很难摸透。
另外，我所培养的这种细胞很难在96孔板上帖牢，即使是细胞生长状况很好时，也只碰上仅有的几次贴壁的情况，这是个一直捆扰我的问题。
我还遇上这样一个问题，细胞经常呈集落状生长，不均匀贴壁，集落集落之间好象出现生长抑制一样。把这样的细胞经过消化后，直接加入培养基不换瓶，则细胞能贴壁均匀生长，可是当再次一传二或三时，新瓶子的又是集落状生长。
各位有经验的XDJM，能否给我一些建议？不甚感激呀！
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join[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好！不知你查的文献的结果是怎么样，人家要是做过是最好的，你可以参考一下人家所用的浓度来试一下你的实验。但别人要是没做过相似的实验的话，看看有没有人用这个或这一类的药做过细胞实验，根据他们用的浓度结合你的实际情况选几个浓度做个浓度梯度关系，看看结果如何？再具体筛选。
我做的是药理血液方面的课题，因此可能对药物筛选有点熟悉。如果你还有什么问题的话或想更具体讨论的话。可以写信给我。
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
别人是在人的细胞系上做的，我是用小鼠细胞系，不知这样有什么要改变的？
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