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标题:【讨论.精华帖.】细胞培养专区

xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

promega的MTS法？说来听听……
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Ao7[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 xingyi08 于 2012-9-16 10:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

promega的MTS法？说来听听……

楼主请看关于MTS：（来自cuturl('www.promega.com')）

CellTiter 96® AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay

cuturl('http://www.promega.com/catalog/CatalogProducts.asp?catalog%5Fname=Promega%5FProducts&category%5Fname=&description%5Ftext=CellTiter+96%3Csup%3E%26%23x00AE%3B%3C%2Fsup%3E+AQ%3Csub%3Eueous%3C%2Fsub%3E+MTS+Powder&product%5Fid=G1112')
Protocol Technical Bulletin #TB169.
cuturl('http://www.promega.com/tbs/tb169/tb169.pdf')

Related Products

CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay
cuturl('http://www.promega.com/catalog/CatalogProducts.asp?catalog%5Fname=Promega%5FProducts%5FCatalogProducts&category%5Fname=CellTiter+96+AQueous+One+Solution+Cell+Proliferation+Assay&description%5Ftext=CellTiter+96%3Csup%3E%26%23x00AE%3B%3C%2Fsup%3E+AQ%3Csub%3Eueous%3C%2Fsub%3E+One+Solution+Cell+Proliferation+Assay')

CytoTox 96® Non-Radioactive Cytotoxicity Assay
cuturl('http://www.promega.com/catalog/CatalogProducts.asp?catalog%5Fname=Promega%5FProducts%5FCatalogProducts&category%5Fname=CytoTox+96+Non%2DRadioactive+Cytotoxicity+Assay&description%5Ftext=CytoTox+96%3Csup%3E%26%23x00AE%3B%3C%2Fsup%3E+Non%2DRadioactive+Cytotoxicity+Assay')

其实四唑盐法的原理都一样，所以只是操作的简便，相对于MTT而言，并没有突破。如果要找放射性掺入法的替代，BrdU Cell ELISA或是BrdU掺入后流式细胞分析是一个很好的选择，只是价格太贵。去年￥5700买了一个试剂盒，做了三个试验就快用完了。可是花150元买500mg MTT，做到退休都用不完。
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

    这种方法的灵敏度和重复性如何，能完全代替同位素掺入法吗？
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发表于 2012-9-16 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

虽然放射性掺入法有这样那样的缺陷，但是除了BrdU掺入法以外，其它方法无可替代。
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发表于 2012-9-16 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
293细胞的培养主要是看他的传代数，太多了不行，所以唯一的办法是找到传代数少的细胞，然后培养。作过比较老的293状态就很差，而传数少的细胞贴壁还是很不错的。
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kulee[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家好，看到各位的帖子，在下学到不少东西。我正在培养血管，也遇到培养液和培养基的问题，因为培养细胞和培养器官有所不同，在培养液的选择上本想用DMEM/Ham F12混合培养液，现在的问题是，实验要求培养液糖浓度应在正常血糖水平，即5.0mM/L左右，且需要较长期培养（7天），Ham F12糖浓度过高，不能使用。因此请教各位，换用何种培养液较为可行？望不吝赐教！多谢！
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，想不到大伙对让细胞培养有如此多感想，实在令我很有共鸣。
总体感觉是293比hela,sy5y或者PT67要难养一些，但是使用好的培养条件，和注意无菌操作肯定会没问题，而培养基的组份一般在网上都可以查到，相信问题也不大。最要命的可能是新来的细胞在运输途中就出了问题，我曾试过只有非常少量的细胞存活下来，经过精心照料才难使其恢复元气，这花费了一个月的时间，实在是太不爽了，唯一庆幸的是这个细胞是白送的。
有哪些高手使用过乒乓的方法来提高病毒滴度？
效果如何？
请告之！
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阿司匹林[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得养这种细胞有几个关健步骤：
1，注意无菌操作，配制培养液时尤为重要，并过滤除菌，实际上很多情况下生长不良是培养液的问题
2，如果贴壁不好最好用多聚赖氨酸（生长基质）外理培养瓶
3，细胞种植密度不要太低，因为细胞与细胞之间会发出促进相互生存的生长因子
4，注意及时更换培养液（培养液发黄，或者2-3天）
5，传代不要急，待完全长满出现接触性生长抑制后再传代比较好，毕竟那又是另一种环境
6，传代时先用少量培养液先培养3-5小时，然后再补足培养液，这样容易贴壁
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feima+[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

湖北有做腺病毒的吗？我去湖医问过，他们让我如果搞到腺病毒转染质粒可以去他们那里做，可他们自己也没有做过。我找老外要了一同源重组好的质粒，目前正在找实验室，麻烦您能推荐一个吗？去武大问过，现在也没人做。
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daod[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

293和C2C12我都养过，培养液均为高糖DMEM。对于293来说，传代次数并非决定性因素，在细胞生长状态较差时，可以以1：10传代来激活细胞。再有血清的使用最好是新生牛血清，可以不用灭活。293细胞传代时机为达80-90%汇合，传代比例为1：3。切记一定要使用塑料瓶，可以反复使用，但要经过洗液处理。 C2C12细胞不能密度过大，否则会出现分化表型，使用玻璃瓶就可以。 我一直在从事腺病毒载体的制备工作，其实很多东西不必到别人的实验室去做，自己查查操作手册或指南，照葫芦画瓢就可以了，但是重组病毒的鉴定一定要严格，我想诸位不会是仅仅为了做病毒而做病毒吧，肯定还有后续工作，对吗？
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