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标题:【讨论.精华帖.】细胞培养专区

daod[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教一下大家，所说的一次性培养皿具体怎样处理，怎样消毒，好象高压湿热消毒不行。很想能得到您的指教。
    先谢了。
  在有一个问题：我现在在做大鼠气管上皮细胞的原代培养。原代培养的很好，但是再传代时，细胞的生长状态很差。传代时，我没用胶原包被培养6孔板。不知道有那位朋友做过。原代培养的气管上皮细胞能不能传代，传代时一定要用胶原包被吗？
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tieshazhang[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关于一次性培养皿(塑料制品)再次使用的问题：
1.泡酸过夜；
2.蒸馏水反复冲洗十遍（目的是去处残酸），40度烤干；
3.紫外线等照射30分钟以上便可应用，照射过夜更好。
这只是我的一点经验，我在培养血管内皮细胞和平滑肌细胞时经常这么用没发现污染，细胞贴壁和生长良好。不知对你是否有用。还请大家发表意见。
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utt0989[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DMEM中有谷氨酰胺，为什么还要加呢？是不同厂家的产品，不同的成分吗
我用的DMEM（Hyclone）中有谷氨酰胺，只需每隔两周添加。
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utt0989[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
配DMEM时，用盐酸和氢氧化钠调节PH值，行吗？
在配1640时为什么用二氧化碳和氢氧化钠调节？
请指教！！
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owanaka[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Essential protocols for cell culture
cuturl('http://www.qiagen.com/transfectiontools/cell_protocols/default.asp#ref')
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orangecake[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我个人也就的MTT测细胞的增殖才是经济，方便，实用的方法
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Current protocol中SP2/0推荐用90% 胎牛血清(FCS) + 10% DMSO冻存。我们实验室用50% FCS + 40% Medium + 10%DMSO.

Current protocol 还建议细胞进入冻存液后，到真正入-70度冻存这时段不应少于15分钟。并且认为这段时间直接影响以后复苏质量。但一些却认为，细胞入冻存液后，应尽快冻存，你们的看法呢？
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发表于 2012-9-16 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

梯度降温，每分钟1度似乎比较理想
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fklo83[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问哪位朋友有 GP2 293细胞呀？ 我这里养的很差，需要大家帮助。
293细胞是不是不是很贴壁？我养别的细胞贴壁很好，而293总有一部分贴的不好。
多谢。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-9-16 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞培养：RPMI-1640培养基如果标签上已经注明"with L-glutamine"，还要不要添加谷氨酰胺？添加量多少？象这种已含有L-glutamine的1640，其L-glutamine的浓度是多少？
再进一步，一般细胞（肿瘤细胞如S180，B16等）的培养需要谷氨酰胺的浓度应该是多少？
谢谢！
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