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标题:【讨论.精华帖.】细胞培养专区

bananapeople[使用道具]
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发表于 2012-9-16 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你描述的不太清楚，有可能是霉菌，但霉菌污染在镜下可看到明显的菌丝。新洁而灭只是表面消毒，而不是灭菌，擦拭表面可降低污染几率，你作的是对的。但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。可在前面养细胞时加上制霉菌素或放线菌素D或双抗，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作了。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-9-16 11:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢，好在只是个别污染，我看了，没有菌丝，应该不是霉菌吧，我把污染的细胞在外面又放了一天，看到死细胞团块明显增多，不过还有很多细胞仍然贴壁，不知到底是什么污染。
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plaa[使用道具]
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发表于 2012-9-16 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问各位细胞培养前辈，我现在要培养乳腺癌MDA231细胞，我找的细胞株是用1640培养的，而我从书上和文献上看，用于转染最好用DMEM，问：是否可以改换DMEM培养？改换时应注意什么问题吗？是慢慢过度，还是消化后直接换成DMEM？请指教
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2012-9-16 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我个人经验是1640的缓冲能力要大于DMEM。乳腺癌细胞MCF-7就是用DMEM加胰岛素养的，所以问题可能不大，为防万一，开始可使用1640/DMEM。转染并不是非DMEM ,关键是不能加抗生素，细胞密度，血清浓度，及转染试剂的质量等。
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loli[使用道具]
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发表于 2012-9-16 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我刚刚看了“細胞培養常見之問題與回答”（cuturl('http://www.nhri.org.tw/b5/plan/faqculture.htm')），上面怎么说不能使用与原来培养条件不同之培养基？你说可以，是不是1640和DMEM的组分相差不是很大，所以可以？你说的1640的缓冲能力大是什么意思，是指用1640还好些吗？

另外，我需要MCF-7细胞株，谁有呢？
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-9-16 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我养的HepG2细胞总是成团，想要种到96孔板，很难达到单细胞的要求。消化时间短，成团根本没有办法分开：消化时间长，是分成单细胞了，但是细胞损伤极大。我花了将近2个月的时间也没有摸到合适的条件（痛苦哇！！！！）。那位仁兄养过hepG2，有没有碰到这种情况，怎么解决？会不会是我的细胞株退化的关系。
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一叶[使用道具]
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发表于 2012-9-19 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
污染问题
刚刚开始培养细胞，是成纤维细胞，用DMEM+10%FCS，最近发现细胞总被污染，培养液中漂浮着一团团死细胞壮的东西（不敢肯定是死细胞还是细菌），时间长了会增多，但不见运动（听说细菌是能见运动的），很着急不知该如何控制，我试着用新洁而灭查过，不见好转，不知是什么原因，恳请指点。

我认为是霉菌。我有过两次经历。培养液是清亮的，倒置显微镜下无一点杂质，37度孵箱培养2-3天，任清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，走向死亡》需尽早处理
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大白菜[使用道具]
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发表于 2012-9-19 13:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
出现这种情况时，培养瓶里的细胞长得密吗？有些细胞在密度较高时容易悬浮起来。
要是你的细胞在某段时间总是污染，就要怀疑是否从培养基、胰酶、器皿、移液枪等带进去的污染了。可以用你的培养基做个试培，看在不接种细胞的情况下是否也有这种现象。
要是你担心自己养细胞污染，可以加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素）。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-9-19 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教高手：
我买的CALTAG 公司的 单抗：鼠抗人cd28，catlog no：MHCCD2800 克隆号 ：15E8(CLR-402).鼠抗人cd3：The catlog no.is MHCCD0300 and 克隆号： S4.1(706）
这两种抗体能不能做淋巴细胞培养的联合刺激剂？我用了，淋巴细胞就是不长，有什么办法？还有，淋巴细胞分离时有大量的血小板混入，怎么解决？
谢了！
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utt0989[使用道具]
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发表于 2012-9-19 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1640的缓冲能力大是指在相同培养条件下，1640的pH变化小。我的感觉是“不能使用与原来培养条件不同之培养基”理论上应是这样，实际操作起来是可以换的，如MEM培养的细胞可以用DMEM，有些用1640的可以用DMEM或DMEM/1640，但一般情况是低营养的可用高营养的代替。你在哪里，用MCF-7何用？
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