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标题:【讨论.精华帖.】细胞培养专区

zhezhe[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

目前遇到的问题是：隐窝分离下来后，高糖DMEM培养基培养，但细胞就是不争气，培养5天就剩下不多了，还请哪位指教。先谢了。

原代细胞一般选择低糖培养液好一些，传过5代以后就可以用高糖培养也了。
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再请教你一下，建系的细胞是永生细胞，它也存在传代数吗？谢谢指教

———————————————————————————

是的，代与代之间的许多性质不同。有时有很大差异。
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
原代细胞用低糖培养基，

建系细胞用高糖培养基。
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langlang[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再请教你一下，建系的细胞是永生细胞，它也存在传代数吗？谢谢指教

——————————————————————————————————————

有些建系了的细胞也是经过病毒改造了的,可以保持原来细胞的特点,但可以传代.
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daod[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位有没有用1640养过293细胞，效果一样吗？
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我刚刚开始养细胞,发现培养瓶中有一些小黑点(物镜20*),且有增多的趋势,并不停的在动.但刚开始不影响细胞的生长,过了一段时间后细胞生长状况开始不好.不知是什么原因?
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发表于 2012-9-19 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这大概就是所谓的黑胶虫，双抗、制霉菌素等均无效，只有抛弃。
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谈谈293细胞：

人胚肾细胞系293是一种E1区缺陷互补细胞系。用磷酸钙共转染法很容易使DNA进入细胞。悬浮的293细胞很容易大规模培养，但不容易长期保持稳定，，应用时最好采用单层培养。
传达次数较少的单层培养293细胞是成功获得重组病毒和病毒斑的关键。２９３细胞的培养质量特别是单层培养的品质情况是病毒斑形成的重要因素。也是重组子构建成功与否的关键。２９３细胞在传代１２０次以后，其生长状况不再完全是单层的了，偶尔会形成局部的细胞成团聚集，一旦出现这种情况很能形成病毒斑。应立即抛弃，重新引入新传代的细胞。单层培养细胞在５－１０％FBSDMEM中能生长很好。一般来讲，１：１０传代后，一周可以长满。严禁过度生长，这点很重要。因为会导致细胞密度加大和堆积，影响病毒斑的形成和转染
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

293细胞用1640养没问题，不过DMEM不比1640贵哪去呀，干吗不用１６４０
２９３用１６４０养时得驯化，我做过一次，２－３代就可以了。
保险起见，建议１０带以上，以期遗传性状稳定。祝你好运。
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-9-19 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建系的细胞也存在寿命问题，真正永远生长的细胞系是不多见的。
大多数细胞系的寿命是１.5－２.0 年，或者１５０代，所以，细胞系在引进后一定要冻存，所以细胞系有老化问题，同一细胞系，不同实验室也有可能不一样，原因就在这。
明白了吗？
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