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标题:【求助】如何防止细胞涂片免疫组化时脱落

vcve[使用道具]
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免疫组化并不是只显示核或胞浆,这取决于你所要检测的抗原的定位,例如对于神经细胞,NeuN即表达于核中,而β-tublin则仅表达于胞浆.
但是有时免疫组化也会出现不可靠的情况,当你所使用的缓冲系统PH不对时,或者抗体的质量不高,储存方式不当,都有可能出现待检测抗原并不分布的地方出现阳性结果,因此我们最保守客观的说法一般是A免疫反应阳性,而不说A阳性.
因此为得到确切的结果,至少要重复三次都得到相同结果,并且每次都需要设阳性及阴性对照.
若A抗原应出现于胞浆,却在胞核中出现,则可同时染仅在胞浆中出现的抗原B,以检测缓冲系统是否有问题.若无问题,需要进一步排除抗体问题
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duoduo[使用道具]
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1 不要反复冻融
2 37℃ 30min 干燥或者室温吹干
3 适当使用黏附剂:PLL,鼠尾胶、明胶
4 不要直接冲刷细胞
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yychen[使用道具]
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我用的是鼠尾胶原效果不错
作免疫组化时主要不要过多的振荡,可多洗几次。振荡过多,细胞脱落会比较多。
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yychen[使用道具]
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还有需要注意的是每一步加液体时应从培养孔的壁上轻轻加上.使液体慢慢到达孔底。
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969[使用道具]
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我在做组织分离的活细胞的免疫组化,谁能告诉我要用多少细胞数?稀释多少浓度?转速多少?多长时间?丙酮固定吗?先谢谢了
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