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标题:【求助】神经细胞原代培养细胞成团的原因？

wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2012-10-7 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 wanglaoshi 于 2012-10-7 14:54 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

另附一张高倍镜下的，  

我怎么没有发现有神经元存在？？
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wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2012-10-7 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我怎么没有发现有神经元存在？？

————————————————————————————————————————————————————————

因为我想要的就是没有神经元和成纤维细胞，只有星形胶质细胞和小胶质细胞才对，这是不加阿糖胞苷14天时的照片。
请问midas，这里面都有哪些细胞?
多谢指教.
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发表于 2012-10-7 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
怪不得！
有较长突起，但突起又是较粗的为星形胶质细胞；
生长在众多细胞之上，折光性强，体积又小的是小胶质细胞，
有没有成纤维细胞不太好说，应该有一些。
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发表于 2012-10-7 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.对于接种密度，发现用计数板不准，所以现在我都是凭经验，四个乳鼠接种一瓶，这样正好一周左右可以传代。
2.一次性的塑料培养瓶可以不用明胶等处理，用明胶包被的玻璃瓶刚接种时长得慢些，但一周以后长势也可以，我们这一般传代就用这种处理过的玻璃瓶，养的原代胶质细胞很好！
3.你那张图片上主要还是星形胶质细胞，不规则形、分支粗短的。形态小、折光性强的应该是小胶质。神经元基本没看到，成纤维细胞就不好说！
4.我们是接种后48小时用10μM阿糖胞苷抑制胶质生长，抑制48小时后更换新鲜培养基DMEM/F12。
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发表于 2012-10-7 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得如果经费充足，当然最好用Poly－D－lysine。我们养神经元用的就是这种，但养原代胶质只要1%明胶即可。
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wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2012-10-7 15:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢各位高手。
我再请教一下，用PLL或PDL被时，对于包被液的配制，加入量，时间等有什么特殊的要求吗？
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2541[使用道具]
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发表于 2012-10-7 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
就用灭菌的去离子水配的，只要盖过的就行了，一般处理过夜。
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xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-10-7 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如何消化，胶原酶可以吗？多少浓度？消化多长时间？离心的转速？能否说的具体些，多谢！
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milkdog[使用道具]
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发表于 2012-10-7 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般而言，包被明胶的培养效果比PLL好，明胶使用浓度实际上不需要到1%，2.5-5mg/ml即可。据我们的经验，明胶溶于0.1MPBS，PH6-7，其中补充BSA1mg/ml包被效果最好，包被于4度过夜。然后用去离子水清洗。当然如果有条件可以使用NHS 和 EDC进行交联，这样的包被器材比较耐用，不易脱落，一周以上明胶脱落的也不多。在图片中似乎有个别成纤维细胞。培养是很成功的，星形、小胶质细胞的基本形态出来了。
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milkdog[使用道具]
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发表于 2012-10-7 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

神经胶质细胞的间质成分不是特别丰富，而且容易在体外培养生长，因此使用常规的组织块法、胰酶消化法、胶原酶消化法均可。其贴壁速度慢，初期生长慢，常常混有成纤维细胞、内皮细胞、巨嗜细胞等，经数次传代后形成均一的单层生长的细胞，星形细胞活力好一些，占绝大部分。当然你要是有钱的话，可以去买roche公司的特制消化酶，专门用来分离神经组织细胞。
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