“我走的是线性梯度，mp：A1:磷酸氢二钠（10mM,pH=3),A2:磷酸氢二钠（10mM, pH=2) B;乙腈，A/B=60/40, gradient：10min内，由A1/B=60/40变为A2/B=60/40”
不得不说，你pH梯度这个方法设计得确实很巧妙，不过还是有一些考虑不周的地方！
先说巧妙的地方：1.利用了三元泵走梯度作pH变换。想得巧！
2.缓冲盐选择了pH在2——3没有缓冲作用的磷酸氢二钠（pKa约12），这样便能较好地完成pH的“
线性”梯度。
不周的地方是：pH2时能出峰吗，如果冲不出来呢（这个假设如果成立，是不是就解释了这个pH梯度不作用的原因）？那将梯度的终值设为2是不是 欠考虑，为什么不设成更有把握的2.5呢？
还有一个可以尝试的方法是整体条件pH2.5的情况下，加大流动相水的比例，看能不能有保留。
还想到一点：如果只有在等电点时（pH2.5）死时间出峰，而在别的pH条件下都不出峰；从C18的分离原理来说，不带电荷都死时间，那带电荷（极性更大）就更是死时间了，或许样品不是没出来，而是直接弥散在流动相里了。关于这点的验证，严格地做一下空白实验应该不难看出！
C18不好用的话试一下强阳离子交换柱（SCX）吧！
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本帖最后由 j-1982 于 2009-7-24 05:10 编辑 ]
