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注意事项
1、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况下,白细胞较难染色,因此需要较长的培养时间或增加细胞数量(~105个细胞/孔)。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于悬浮细胞,在培养1-4小时后,可先从培养箱中取出,目察染色程度或用酶标仪测定决定。若染色困难,可将培养板放回培养箱,继续培养数小时后再确定。染色的最佳时间可定为悬浮细胞的最佳培养时间。对于贴壁细胞,培养时间一般为1-4小时,但在培养30分钟左右即可取出目察染色程度(根据细胞种类而定,需要摸索一下条件)。
2、注意不要将气泡带到孔内,否则会干扰观察读数。
3、96孔板在培养箱中,由于湿度不够,而培养箱由于具有一定的温度,使得边缘的孔水分蒸发较快,导致培养基中各种成分浓度变化增大,导致细胞状态不同。对于这种现象,要保证培养箱中的湿度,减少开关培养箱的次数和时间。
4、注意细胞悬液一定要混匀,以避免细胞沉淀下来,导致每孔中的细胞数量不等,可以每接几个就要再混匀一下。
5、为了减少误差,培养板的四边孔只加培养基或只接种细胞,而不作为指标检测孔。
6、建议采用多枪头的移液器,可以减少平行孔中的差异。
7、在用移液器加 CCK-8试剂时,速度要快,减少试剂在移液器上的残留。
计算抑制率公式:(对照-给药)/(对照-本底)*100%.
对照:加细胞、培养液、加溶解药物的介质、CCK-8
给药:加细胞、培养液、不同浓度的药物、CCK-8
本底:只加培养基、CCK-8