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标题:【讨论帖】一种细胞检测MTT法改良试剂测评

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发表于 2012-10-19 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是的，采用CCk-8可以不必去上清就可以检测。因为它采用一种水溶性的黄色甲 瓒染料，方便灵敏。
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发表于 2012-10-19 12:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

当做药物毒性实验时，若药物颜色为黄色时，有可能会对检测有影响，药物在450nm附近会有吸收，从而产生干扰，解决办法：更换培养基，并进行清洗，换新鲜培养基后，再加CCk-8试剂进行检测。
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发表于 2012-10-19 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用MTT做悬浮细胞，总做不好。CCK－8是否会好一点？
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发表于 2012-10-19 12:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在The Journal of cell biology（影响因子12）上发表的一篇文献：
Autotaxin has lysophospholipase D activity leading to tumor cell growth and motility by lysophosphatidic acid production
J. Cell Biol., 15(2), 227-233 (2002).
cuturl('http://www.jcb.org/cgi/reprint/158/2/227.pdf')
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发表于 2012-10-19 12:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
介绍一个检索文献的好网站，有大量的免费文献，14,914,220 articles in over 4,500 Medline journals, 768,654 free full text articles from 696 HighWire-hosted journals
cuturl('http://highwire.stanford.edu/')
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发表于 2012-10-19 12:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

发表在Nature Cell Biology上的一篇文献：
SMYD3 encodes a histone methyltransferase involved in the proliferation of cancer cells
SUMMARY: Colorectal and hepatocellular carcinomas are some of the leading causes of cancer deaths worldwide, but the mechanisms that underly these malignancies are not fully...
CONTEXT: ...supplemented with 0.9 g l-1 geneticin (NIH3T3 and HEK293). The number of cells was measured with cell counting kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan). Gene silencing effect of SMYD3 siRNAs. A psiU6BX vector was created that contained the......
Nature Cell Biology6, 731 - 740 (01 Aug 2004)
但我没有PDF文件，谁有请给我一份
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发表于 2012-10-19 12:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议大家在做96孔板时，周围一圈孔不要用，因为时间太长，培养液容易挥发。
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发表于 2012-10-19 12:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

发表在JCB上的一篇文献：
Autotaxin has lysophospholipase D activity leading to tumor cell growth and motility by lysophosphatidic acid production
J. Cell Biol., 15(2), 227-233 (2002).
cuturl('http://www.jcb.org/cgi/reprint/158/2/227.pdf')
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发表于 2012-10-19 12:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是cck－8试剂的试用者，首先感谢你的赠送。
但我今天实验结果不理想，希望你能够帮我分析一下。

我是200ul（3000个）细胞（贴壁细胞）种到96孔板。
培养12小时后染毒，5个浓度组。
染毒24h后镜下观察：最高浓度组细胞基本死亡，次高浓度组有细胞死亡，其余组未见明显异常。

弃培养基，PBS洗一遍，加110ul的培养基，10ul的cck-8。
培养2个小时，酶标仪450nm下检测。

检测结果十分乱，各个浓度组之间没什么差别（MTT时可以明显看到剂量效应关系），平行对照的值差别有好几个在2倍以上。

你能不能帮我分析一下原因，我明天可能还要用CCK-8做。

注：加cck-8时，没带进气泡。
按照你们的资料上说，cck-8加入培养后，细胞不会死。但我在加入培养2个小时时，镜下发现各个组细胞都有死亡现象。

谢谢
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发表于 2012-10-19 12:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
cck-8的优点就是它形成的Formazan是水溶性的,故不必去掉上清液,可以直接加cck-8后培养一定时间后酶标仪450nm下检测,建议你按照此方法试一下。
另外你在用PBS清洗时，药物是否清洗干净，建议你在不加药物条件下，加cck-8看一下是否有细胞死亡现象。因为cck-8含有2种成分：WST-8和PMS。WST-8对细胞染色不是直接进入细胞内，而是通过PMS和细胞进行电子交换从而完成染色，故一般不会造成细胞死亡现象。
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