【求助】发酵罐小试问题 - 经验共享

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标题:【求助】发酵罐小试问题

小螺号[使用道具]
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发表于 2012-10-20 16:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

发酵参数的优化是个何很繁琐的工作，慢慢来。

pencil菲[使用道具]
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发表于 2012-10-20 16:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

大肠长到5都成问题，我们大肠随便长长都是一百多的OD

8princess8[使用道具]
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发表于 2012-10-20 16:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得接种量不需要加大，这个应该不是主要的原因。你要注意比较发酵过程中大罐和小罐的过程参数的差异，比如OD、pH、DO等能检测的参数的变化趋势，试试从这些参数的差异中能不能找到原因。

jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-10-20 16:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1、你的培养基配方？
2、你的培养工艺？包括搅拌、罐压、补料、pH调控、温度等都需要。
有了上述两个东东，才能给你确切的建议，只有问题，没法回答……

————————————————————————————————————————————————————————————————

培养基配方：玉米浆3.3%，KH2PO4 0.17%，MgSO4 0.033%，富马酸 0.83%，NaCl 0.2%，接种量 0.033%，有加消泡剂，罐体是玻璃的,pH7.0，温度40-42℃，没有补料，这些都是大罐上的，我照做的，只是把风量和转数提高了

lixi559[使用道具]
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发表于 2012-10-20 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

既然知道溶氧，把小罐的溶氧调到和大罐一样，转速风量都增加，但不能只增加一个，因为还要考虑菌承受的剪切力情况，剪切力过大也不利于生长，还有罐压要考虑，跟大罐保持一致，
楼主考虑下六楼说的情况，增加氮源 ...

————————————————————————————————————————————————

大罐上没有溶氧电极......转数风量两个都增加了的，我刚做了加大氮源的，结果比以前要稍微好些

remenb[使用道具]
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发表于 2012-10-20 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

溶氧达不到，pH初始设为7吧。转速设的太低了。最高转速设为1000转（大罐转速不能太高是因为剪切力及功率的问题，小罐不存在这个问题），不过不知道你的培养基是什么，防止起泡，要不时加消泡剂，通气量每分钟和发酵 ...

————————————————————————————————————————————————————————————————

培养基配方见下面的回答，灭菌前就在培养基里加消泡剂了。发酵液体积为3L，通气量设定的为5L/min，会不会大了？昨天将转数提到300rpm，结果比以前稍微好些，可OD还是不达标，罐体是玻璃的。我想着是不是培养基配方就有问题啊

xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-10-20 16:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

OD值达不到说明培养条件对菌体有影响，放大的时候转速风量都要按经验公式来放大，比如保持VVm相等，按照搅拌桨线速度放大等等，如果转速过大对菌体伤害较大，应为大肠杆菌还是比较脆弱！另外，看看你的培养基什么的是不是有变化，或者菌种的问题，做下摇瓶实验呢？要从全面考虑小试失败的原因，还有其他很多原因，是否染菌，灭菌温度是否过高破坏培养基，放大是否合理，还有就是设备的检修等等！

xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-10-20 16:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

另外消泡剂是不是加的多了？也有影响的哈！

qqq111[使用道具]
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发表于 2012-10-20 16:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我不会跟你扯什么公式，根据经验，大肠杆菌转速800-1000转是完全可以的。5L通气也可以，初期刚接种那会通气和转速不用太高。前2-3个小时可以转速200-300，通气适当小点设个2L就可以了，后期根据生长需要慢慢隔1-2小时稍微加大点通气量，同事慢慢100 100的调转速，直到最终转速到1000 ，这个过程只是一个大概的过程。因为你们那边好像没有溶氧电极。
另外大肠杆菌没有那么脆弱，小罐上的拿点剪切力还是可以承受的，楼上的如果没做过大肠杆菌发酵请不要根据自己的想法误导别人

zhezhe[使用道具]
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发表于 2012-10-20 16:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

看了你的培养基配方了，接种量太少了，发酵罐一般5%-10%接种，0.03%接种不知道是个什么概念。为什么选择40-42℃发酵，会不会是因为大罐的散热系统做的不好，一般大肠杆菌发酵都是37或37以下。培养基中有玉米浆，你怎么确定你的菌浓。
还有一点就是你培养基氮源基本没有，参考别的文献，建议你氮源可以添加无机氮源硫酸铵或者条件好添加蛋白胨或者氨水或者硝酸钾或者大豆粉。
之前你说你添加氮源，OD好一点了，可能是你的氮源添加的太少了，蛋白胨等有机氮源添加 1%的量试一下。

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