小中大你的问题，我在培养中也曾碰到，当细胞特别少的时候，离心法彻底更换培养液，反而会越来越糟。可能细胞增殖需要合适的微环境，细胞之间会“团结协作”相互促进，例如分泌生长因子等。如果不断换液，就会打破良好的氛围，我的经验是细胞浓度低于10万/ml，可以将培养瓶“直立”放置（仅限于悬浮生长的细胞，如淋巴细胞），在瓶底浓缩细胞。倍倍稀释法换液比较好，保证细胞微环境变化不大。
另一个变糟的原因是，离心会增加污染机会。
还有，每次离心，来来回回“倒腾”细胞的时候，会有10-20%的细胞损失。
当然，细胞浓度增大后，代谢废物多了，还是要离心换液。但这时“丢”细胞已经不是主要问题了。
希望你的细胞也能快快长
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谢谢，我明天师兄还会给我复苏一部分细胞，我会根据你的建议很认真很仔细的培养，希望细胞会有起色，以后遇到了问题还会请您帮助。
