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标题:【讨论帖】看图说细胞-状态好坏鉴别

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QUOTE:
原帖由 shenkunjie 于 2012-10-22 15:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
干得好!细胞培养这种事情本来就是需要我们平时多下点功夫,经验的积累才能培养出真正的本领!,加油哟,各位!

我个人的经验,如果是增殖很快的肿瘤细胞胞系,如Raji等,当细胞处于少量增殖期时,状态比较“稳定”。“稳定”是指细胞基本同步化,处于同一细胞周期,大小、折光性、颗粒性、膜表面分子,都比较钧一。

更重要的是细胞膜强度大——若在快速增殖期,细胞极度膨胀,成为“超级大个头”,胞膜为了迎接即将到来的“重新分配”,变得很柔弱,就像孕妇的“肚皮”,十分松弛,经不得碰撞!——离心,洗涤,振荡,重悬对细胞都是很严重的“冲击”。

不知到其他各位有什么经验,一起交流交流吧。
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duoduo[使用道具]
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首先,你要有细胞培养所必要的设备,比如培养箱,培养瓶,培养板等等
其次,就是试剂了,我一般是用RPMI —1640培养液+10%fcs (还包括谷氨酰胺,庆大酶素,heps等成分)+rIL-2 (25-50U/ML)培养人pbmc。每3天换液一次,加rIL-2 一次。
细胞培养最最重要的就是要注意操作过程中的无菌概念,一定要注意无菌操作!!!!否则,细胞培养根本不可能成功,这一点,你可以参考精华版的几个高手的经验。
若是你想在培养过程中得到不同的t细胞亚群,就需要用不同的刺激剂
一般我用的有okt3 ,okt8 ,okt4,mtb-ag(结核杆菌抗原),分别能刺激t总,CD8 T,CD4T,和gama-delterT 的增殖。但是这样得到的t细胞亚群都是活化后的,要得到非活化的t细胞亚群,现在我知道的,有磁珠抗体分选和流式细胞仪分选。
另外,我对t细胞培养也是刚刚起步,希望以后能多多交流经验。
祝你早日细胞丰收~~~
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相关疾病:
肿瘤
duoduo:
多谢指教,我现在养的是肿瘤细胞,有的培养液是RPMI-1640,没有加10%fcs (还包括谷氨酰胺,庆大酶素,heps等成分),不知是否可行?还有,你所说的okt3 ,okt8 ,okt4,mtb-ag是什么,怎么得到,具体该怎么做,可否告诉我详细点吗?
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duoduo[使用道具]
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相关疾病:
结核
不加小牛血清的1640 称为不完全培养液。它不仅包括了细胞生长所需要的基本营养物质,如维生素,氨基酸,糖。还含有细胞生长所必须的维生素,矿物质。 其他的一些人工合成的培养液如DMEM,TC199,Eagle's MEM 等也都含有细胞生长所需要的营养物质。但是这些人工合成的培养液,在使用的时候,仍然需要加入一些天然的营养成分,比如人和动物的血清,血浆等。常用的有胎牛血清(fcs)或者新生牛血清(Ncs),他们都含有多种促细胞生长因子,和多种脂溶性维生素,某些微量元素等,这些都是细胞生长所需。常用的血清含量为10%-20%. 我个人的经验认为,你要想让细胞多多的繁殖,含量就多些。这样细胞吃饱了,生长和繁殖才会很好的进行。
okt3,okt8 ,okt4 其实就是抗cd3单抗,抗cd8单抗,抗cd4单抗 。是做单克隆抗体得到的,具体如何制备,请看有关单克隆抗体制备方面的资料。我用的是别人做好的,自己也没有制作过。要是你做,我很想得到一些现成品,嘿嘿,不知道可不可以啊??
mtb-ag 就是结核杆菌低分子多肽,它能特异性的刺激gama-delterT 细胞增殖,是将结核杆菌高压后得到的上清(具体操作略)我们曾经做过检测,在不同人的未活化的pbmc中,gama-delter T 细胞比例在5%左右,用mtb-ag刺激活化后7-14天,gama-delter T 细胞的比例明显升高高,最多达到95%。
如果你需要知道如何制备mtb-ag,请过几天。
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大家看看我培养的人的t细胞
看到那个克隆就说明t细胞培养成功了,嘿嘿
我分别用的是okt3 和mtb-ag刺激培养的

mtb-ag活化后形成的菊花样克隆


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duoduo[使用道具]
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还是mtb-ag刺激的,大家注意那长长弯弯的细胞,那就是活化后的淋巴细胞,怎么样?是不是和静止的时候差别很大??


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duoduo[使用道具]
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okt3刺激形成的克隆群~~


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哪位能不能讲讲贴壁细胞的状态情况?特别是293细胞。
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原帖由 3648755 于 2012-10-22 15:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

哪位能不能讲讲贴壁细胞的状态情况?特别是293细胞。

老实说,我们这一直是做淋巴细胞,其它的细胞没有太多经验。

不过你可以试试在论坛里面“搜搜”,也就是:点击页面上方“Search",用“贴壁细胞”为关键词,定会让你眼前一亮。

有点耐心,试试吧。
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还是mtb-ag刺激的,大家注意那长长弯弯的细胞,那就是活化后的淋巴细胞,怎么样?是不是和静止的时候差别很大??

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看看下面的图,对比更明显。
第一张,静息
第二张,活化


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