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标题:【讨论帖】看图说细胞-状态好坏鉴别

yes4[使用道具]
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看了你和各位战友的帖子真是收益非浅,对于培养悬浮细胞的初学者非常有用,建议可将标题改为“悬浮细胞培养经验交流专题”
最近在培养THP-1细胞(单核细胞株),因是新手目前细胞状态仍让我担心。刚开始从细胞库拿回时,细胞状态还行,回来传代1天后,就有不少细胞变小皱缩,镜下看细胞大小不一很不均匀,高倍镜下看细胞内有许多成团的小颗粒,核颜色深。已快半月下来,镜下看虽仍有好多活细胞,但数量离传代的标准还不够,培养液的颜色几天也没变黄。细胞这样半死半活的真让我着急(买细胞花了我近1千)。今天才看见上面的帖子,希望能救回自己的细胞。
也请有培养THP-1经验的兄弟多提供宝贵经验。
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nn255[使用道具]
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不知你是否用PERCOLL之类分的,如果是,吸出中间一层后,离心转速稍大一些,时间稍长些(3000RPM,15MIN),离心后后不要直接倾倒,用吸管自上至下吸去1/2或2/3,振匀再补满PBS再离一次。你试试看吧
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daod[使用道具]
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有境界,向你致敬。请教一下:用96孔板培养悬浮细胞必须用U形底的吗?平底板为什么不可以?
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ha111[使用道具]
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神经元培养HEPES在1L培养基中加入3.745g,谷氨酰氨是330mg/L,可以用三蒸水或DMEM配置。用时用滤器滤一下即可。 0票
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各位前辈好!本人现养着U937细胞,用1640+15%血清,可细胞总是在复苏的第3天以后开始出现大片的死亡(复苏后第一次换液时看着还挺好),也没见明显污染,特纳闷。特请高人指点迷津,谢谢!
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831226[使用道具]
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再请问一个问题:
我的Raji细胞状态有些差异,一个培养瓶里,既有菊花样大克隆,又有3~5个细胞集在一起的小克隆,还有很多衰老变形(伸出小伪足)及死细胞,我现在做的离心换液好象无法改变这种状态。盼赐教!
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谢谢楼主,让我对细胞的好与不好有了直观 的认识,建议多贴一些细胞培养的照片给大家学习。我是做肝细胞培养的,如果有肝细胞的照片就更好了!
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穿越时空[使用道具]
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再请问一个问题:
我的Raji细胞状态有些差异,一个培养瓶里,既有菊花样大克隆,又有3~5个细胞集在一起的小克隆,还有很多衰老变形(伸出小伪足)及死细胞,我现在做的离心换液好象无法改变这种状态。盼赐教!

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Raji细胞是肿瘤母细胞,每一个细胞在适当的条件都可以增殖,一些细胞从大克隆群上掉下来,便会自成一体,“开辟新的王朝”,也就是一个新的小克隆。

我在培养中发现,一个非常大的克隆群,往往很快会出现大片“衰退”,失去立体感,透亮度减低,最终只剩细胞的残影。猜测:超大克隆群内部的细胞难以获得充足的养分,细胞之间的竞争抑制也是一个原因吧。

建议:每次换液吹打几次,防止超大克隆形成。

试试看吧,或许有帮助。
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mimili_901[使用道具]
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我觉得那些3~5个细胞成的小团看上去状态要好些,能否收集这部分细胞呢?因为目前这种参次的状态细胞生长缓慢,那种超大克隆也总导致很多死亡细胞。
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穿越时空[使用道具]
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我觉得那些3~5个细胞成的小团看上去状态要好些,能否收集这部分细胞呢?因为目前这种参次的状态细胞生长缓慢,那种超大克隆也总导致很多死亡细胞。

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我的经验也是小克隆好些,但只收集小克隆会损失很大。若你的细胞若长得快,不在乎丢掉一些的话,当然可以。
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