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标题:【求助】救救我的THP-1细胞吧!已附图片

pengke1983[使用道具]
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今天联系了好几家代理公司,因该死的疯牛病进口血清进步来。
看来只能死马当活马医了。如果我想转移到12孔板,如何做呢?看来要离心了?我真害怕啊,屈指可数的几个活细胞能耐受马?
低速离心1000r/m,5mim,该没事把?
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qhyu[使用道具]
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有一个办法可以一试:
制备小鼠腹腔巨噬细胞,然后铺在96孔板中,密度高一些,大致以铺满75%左右合适(制备巨噬细胞的方法参考相应的书)。过夜后,用培养基洗巨噬细胞一遍。然后把你的细胞极限稀释,加入到含有巨噬细胞96孔板中,你的细胞1-2个/孔。
注意事项:
1.这个实验费的细胞很少,所以不影响你的其它实验;
2.如果想提高成功率,可以做2-3块板,如果想把细胞做成单克隆,可以把细胞再稀释;
3.此实验顺便可以除去你的污染的可能性,所以,你的实验用品尽量绝对无菌;
4.96孔板周边36孔不加细胞,因为周边孔细胞生长状态不好,但是需加入200ul的液体。
5.好一些的培养液,大致用点20%的胎牛血清吧。谷氨酰胺加足量了。
好了,好像罗嗦得够了。我曾经用这个办法成功地挽救过好几株濒临灭绝的细胞株和污染的细胞株。希望你能成功!
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owanaka[使用道具]
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建议楼主将您的细胞照片发出来看看,到底是污染所致还是别的因素。
增加小牛血清浓度。尽量挽救吧,不行我的细胞可以复苏给你。但是一定设法找到原因,否则给你的细胞也会完完的。
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pengke1983[使用道具]
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看到这么多战友帮助我,我觉得有愧啊,没把细胞恢复过来。
今天看细胞又变差了,瓶内留下大量的细胞残骸,高倍镜下看细胞核颜色变黑,细胞内布满了小颗粒。细胞周围的不停运动的小颗粒越来越多,如果是黑胶虫的话,但颗粒倒是有点亮,不黑阿。我想是不是因为污染影响了细胞生长。昨天给上海细胞所打了电话,说他们以前也用过国产血清,且细胞买回已过了半月,不能优惠啊。另因我们倒置显微镜不带数码相机,我会想办法发上来得。
我同时还培养了ECV-304、3T3L1细胞生长状态都不错,应该可以排除孵箱等问题。我想让我担心的是不是开始买回那天因铁路堵车,细胞培养瓶在我身上晃了近24小时,回来后开始没经验一会儿换液、一会儿离心把细胞折腾的够呛。
nixiao兄,看了你多次出手相助,真的非常感谢,如果方便的话,真的很奢望想从你那儿买瓶THP-1细胞。这次我会重新开始,换掉所有的培养试剂,我想在大家庭的关心下,我有信心养好THP-1的。
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pengke1983[使用道具]
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细胞图片×400,细胞之间的亮点在高倍镜下不停的运动,培养液不浑。


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pengke1983[使用道具]
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细胞的残样,该没救了吧!×400


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pengke1983[使用道具]
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建议楼主将您的细胞照片发出来看看,到底是污染所致还是别的因素。
增加小牛血清浓度。尽量挽救吧,不行我的细胞可以复苏给你。但是一定设法找到原因,否则给你的细胞也会完完的。

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owanka友,不知有没有看到我的细胞图片,没希望了吧?另外问一下,我按照细胞库的要求在1640里加了丙酮酸钠和葡萄糖、巯基乙醇,你认为有必要吗?哦,知道你是南医的该是我大师姐了,我是95的。
我怕我的细胞是没希望了,实验已耽误太长时间,真的可以从你那儿得到细胞吗!!渴望得到大师姐的帮助
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owanaka[使用道具]
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你同时养的其他细胞有此现象吗?黑胶虫现在争论不一,有人认为它对细胞没有严重影响。我没有遇到过。但是个人体会是,THP-1细胞还是挺顽强的,我的细胞曾受霉菌、细菌污染,只是细胞长的速度变慢,但形态还可以。曾经自己配的培养基有一批就是养不好,大约1周细胞就几近崩解,细胞内颗粒增多,类似你的样子。而培养基颜色外观没什么两样(怀疑是PH值的问题),换成另一批配的一周就能缓过来。所以,除了血清外,培养基很重要。所以后来我就买PAA的1640液体培养基(约120元/500ml ),加胎牛血清就可以直接用,比自己配的好很多。至于进口胎牛血清,南京生兴公司(不过这个公司办事有点差劲)及上海吉泰有,如HYCLONE、GIBCO、SIGMA的,价格1000元右。现在进口血清进不来,他们应该有些存货。
至于1640内加什么丙酮酸钠和葡萄糖、巯基乙醇,这些都不是非加不可的,我是什么都没加,后来抗生素都不加了。试着不加胎牛血清,细胞也能旺盛地活4天才开始表现为“衰败”。
我就这点小本事,不要跟我太客气。
有空可以MSN联系。
打算下周给你复苏细胞吧。但是你的培养基必须重配。
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dragonkilly[使用道具]
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看了你的帖子我有信心多了。其他的细胞里面也有,但因为贴壁细胞经常换液,所以不如THP-1细胞里多。
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DNA[使用道具]
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THP-1细胞适合在细胞ph环境偏酸环境生长,对培养基变化非常敏感,所以尽量使用相同ph的1640,此外THP-1似乎不太适合长期冻存。

个人建议,传代后切忌常移出培养箱观察,一般THP-1生长相当快,对于状态已经不好的情况,建议传代后4天再观察,一般4天时间培养基已明显泛黄,细胞数量巨增,然后用低速离心去除状态较差细胞,一般500转/m即可。
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