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标题:【讨论帖】 Western blot问题解答专帖

wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1，多洗几次膜
2，较少二抗用量
3，在封闭体系中孵育一抗、二抗
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am10[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
每次目的条带（55-70kD）可以出来，actin却经常做不出来，有时有两孔有很微弱条带，多数时候什么也没有，但是用一样的抗体也做出过很漂亮的条带，不知是何故？
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议换新抗体
你现在用的抗体可能降解了
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c86v[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主，我想知道如何设计实验来证明小鼠的某条基因功能和人的某条基因的功能是一致的呢？
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发表于 2012-11-30 11:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不小心用水稀释了脱脂奶粉
对封闭有没有影响啊
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有影响啊
1，pH
2，缓冲体系中的试剂成分
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火树银花nm[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼主，我用的是湿转，350v，一小时，转移，用丽春红染色后不出条带，考染胶后，条带也清楚。总之，是没转到膜上去，是怎么回事啊？其他操作感觉很标准.
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1，转膜缓冲液配制后预冷到四度
2，建议采用恒流 300mA（蛋白如果50K的话转移时间为1h，100K 1h30min；还要看胶浓度）
3，膜，胶之间要夹紧
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发表于 2012-11-30 11:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是的抗体稀释可以使膜上的杂带看起来没有了，或者只会看见一点点。
但是这样能掩盖 本质吗？
为什么会有特异性比较高的杂带呢？
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是由于抗体非特异性造成的
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