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标题:【讨论帖】 Western blot问题解答专帖

66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的目的蛋白是纯化后的，纯度应该达到80%-90%以上
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

纯化的蛋白上1ug左右足够了
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小野花[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
提取植物叶片膜蛋白的时候植物组织该如何处理？
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好，WB实验中有几个问题急需请教，谢谢：
1. 转膜后可以不用丽春红染色直接做下一步吗？
2.PVDF膜时间久了是否还能用？常温避光保存。
2. 用PVDF膜，转膜后预染Marker是否与用硝酸纤维素膜一样显示在膜上？我用PVDF转膜后预染膜上没有显示，但染色后显示转膜成功。
3. 洗膜必须用TBST吗？可以用PBS-Tween吗？我看到有的就用PBS-Tween，没用TBST。
4.ECL曝光时，膜基本全发光，曝光后胶片上膜的痕迹明显，且出现与考马斯染色相同的条带，什么原因？
期盼详细回复，再次感谢！
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发表于 2012-11-30 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼主，如果我的脑组织样品是做了固定后的样品！是否可以用来做western，对结果的影响大否？谢谢！
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1，可以不染，染色只是检查转膜效果
2，看PVDF膜的保质期
3，一样能显示
4，TBST与PBST都可以，而且除了Tween-20以外，以前的文献中有用Triton X-100的
5，一抗与二抗浓度都太高，需要继续稀释抗体
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 66+77 于 2012-11-30 11:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问楼主，如果我的脑组织样品是做了固定后的样品！是否可以用来做western，对结果的影响大否？谢谢！

可以
最近我正在看这方面的资料
我们可以探讨一下
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avi317[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问一下楼主，我的sds-page和Western电泳结果泳道有大有小，可能是什么原因哪？
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在做ｓｕｒｖｉｖｉｎ，１６.５ＫＤ，半干转膜，２０ｖ，１０ｍｉｎ，转膜后看到膜下的滤纸上也有ｍａｋｅｒ了，是不是转过了？可是胶上也有ｍａｋｅｒ
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 avi317 于 2012-11-30 11:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请问一下楼主，我的sds-page和Western电泳结果泳道有大有小，可能是什么原因哪？

相邻泳道上样体积与上样量不一致造成
上样孔大小不一致
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