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标题:【讨论帖】 Western blot问题解答专帖

wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 whitesheep 于 2012-11-30 11:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我在做ｓｕｒｖｉｖｉｎ，１６.５ＫＤ，半干转膜，２０ｖ，１０ｍｉｎ，转膜后看到膜下的滤纸上也有ｍａｋｅｒ了，是不是转过了？可是胶上也有ｍａｋｅｒ ...

用0.22um的膜
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

western blot 第一种蛋白检测完后，第二种蛋白的检测时，膜的处理是什么谢谢
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 moonlight45 于 2012-11-30 11:23 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

western blot 第一种蛋白检测完后，第二种蛋白的检测时，膜的处理是什么谢谢

1，如果把第一种目的蛋白检测后的抗体洗掉
     用stripping buffer处理，之后步骤从封闭开始进行第二种蛋白的检测
2，如果不洗掉第一种目的蛋白
     第一种与第二种目的蛋白之间分子量差别较大，可以用缓冲液洗去ECL等检测液，然后直接进行第二种目的蛋白的孵育与检测
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发表于 2012-11-30 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做western时，Affinity Purified和purified一抗哪种更好一些？
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
要看抗体的亲和性及特异性了
有很多厂家抗体只用protein A或G纯化
不做亲和
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发表于 2012-11-30 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问版主我的蛋白是18kD的想用NC膜，版主经验什么牌子NC膜和三明治滤纸的性价比比较高？
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发表于 2012-11-30 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
millipore，0.22um孔径NC膜，滤纸whantman 3MM
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发表于 2012-11-30 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一只抗体说是能同时做western和免疫组化，这样的多抗怎么样？会不会说做其中一个更好一点？Thanks a lot!
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要看抗体的质量
有很多抗体是有很多应用的
没问题
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fox_79[使用道具]
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发表于 2012-11-30 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
封闭时用BSA和牛奶有什么区别？如果要降低背景都有什么方法？
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