小中大植物蛋白提取
蛋白提取 (1)取0.5～1.0 g材料，用液氮研磨充分。 (2)加入10 m1预冷的三氯乙酸(TCA)提取液(10％TCA，0.07％DTT，溶解在丙酮中)。充分混合后，放在—20℃1 h。（DTT即DL-Dithiothreitol，中文名为二硫苏糖醇。分子式为C4H10O2S2，常用还原剂，有抗氧化作用） (3)35000 g离心15 min，取沉淀。 (4)加入10 m1预冷的样品洗涤液(0.07％DTT，溶解在丙酮中)，充分混合后，放在—20℃1 h。 (5)12000 g离心15 min，取沉淀。 (6)重复步骤(4)和(5)两遍。 (7)去掉上清后，用parafilm封口，用针在膜上扎几个小洞，冷冻干燥。 (8)放于一80℃，或直接进行下一步提取。 (9)取适量干燥后的样品粉末，按20ul／mg的比例加入样品溶解液(9 M尿素，4％CHAPS，1％IPG缓冲液pH 3-10，1％DTT，35mM Tris)。 (10)放在36℃(不能高于37X2)的水浴中1 h，不时振荡。 (11)室温下12000 g离心15 min，取上清(可分两步离心)。 (12)在上清中加入至少4倍体积的预冷丙酮，振荡，放在一20℃1 h，在4℃下12000 g离心10 min，取沉淀，加入适量体积的水或样品溶解液。必要时(如果盐离子浓度比较高)重复此步骤一遍。 (13)放于--80℃，或直接用于电泳。
