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标题:【分享帖】Transwell侵袭实验总结

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发表于 2012-12-26 15:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我没有固定，直接染色就可以了，不过膜要保持干燥，否则染不上
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-12-26 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问，侵袭实验中用的趋化因子，有没有市售的？一定要自己另外培养个NIH/3T3吗？那不是很麻烦，也费时间？
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2012-12-26 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位好，我想知道的是共培养后下室的细胞对上室细胞的影响应该怎么检测啊！
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2012-12-26 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有什么情况下才要铺基质胶啊，做共培养的时候要铺吗？
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-12-26 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼主，我准备做wnt7a对细胞侵袭的影响，但是不知道transwell下层培养液怎么选择，看了楼主的帖子，是说用5－10％FBS就好，理解好像是说单纯检测细胞invasion，所以想请教楼主我这种情况怎么办？在线等楼主答复，急！
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发表于 2012-12-26 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

研究一种贴壁细胞代谢产生的某种物质对另一种悬浮细胞的细胞毒活性的影响，需要用间接共培养体系吗？还是直接共培养就可以？
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发表于 2012-12-26 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
2．4．1．1 MTT法
① 用棉签擦去基质胶和上室内的细胞
② 24孔板中加入500µl含0.5mg/ml MTT的完全培养基，将小室置于其中，使膜浸没在培养基中，37℃ 4h后取出。
③ 24孔板中加入500µl DMSO，将小室置于其中，使膜浸没在DMSO中，振荡10min，使甲臜充分溶解。取出小室，24孔板于酶标仪上测OD值。
擦去基质胶？细胞不是在胶这面吗，这样擦不就把细胞也擦掉了吗
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发表于 2012-12-26 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我刚接触transwell，问2个弱弱的问题
1、上层培养液与下层培养液由中间的膜隔开，时间久了会不会混在一起啊？
2、一定要把研究的细胞放在上层吗，放在下层可以不？
谢谢你
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987789[使用道具]
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发表于 2012-12-26 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢大侠的总结，我准备要做趋化试验，但是我不知道transwell和boyden chamber是否为一个东西？我查阅的文献要求是用boyden chamber，
请高手指点！
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-12-26 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我刚接触transwell，问2个弱弱的问题
1、上层培养液与下层培养液由中间的膜隔开，时间久了会不会混在一起啊？
2、一定要把研究的细胞放在上层吗，放在下层可以不？
谢谢你

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首先要明确你的实验目的，是做什么实验？侵袭？迁移？共培养？
会不会混在一起，关键是看你的膜上有没有胶，如果有胶是不会混起来的，但如果没胶，应该是能混起来的，不过培养液的相互扩散也是要很长时间的。
另外也要看你的实验目的，是迁移还是共培养？我做迁移，会先在上室加入细胞悬液，过一两个小时再在下室加培养液。如果是做共培养，要把上下室先分开培养，上下室细胞分别贴壁后在放到一起。
如果你是做共培养，不就是要把培养液混在一起吗？否则怎么反映一种细胞分泌的因子对另一种细胞的影响?
如果是共培养，细胞放下层应该也是可以的，如果是做侵袭迁移，当然就不能放下层了。
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