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标题:【分享帖】Transwell侵袭实验总结

wood533[使用道具]
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谢谢大侠的总结,我准备要做趋化试验,但是我不知道transwell和boyden chamber是否为一个东西?我查阅的文献要求是用boyden chamber,
请高手指点!

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似乎是一个东西,不过我没用过boyden chamber,你还是再多查查资料看看,可以问问试剂公司和厂商
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wood533[使用道具]
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2.4.1.1 MTT法
① 用棉签擦去基质胶和上室内的细胞
② 24孔板中加入500µl含0.5mg/ml MTT的完全培养基,将小室置于其中,使膜浸没在培养基中,37℃ 4h后取出。
③ 24孔板中加入500µl DMSO,将小室置于其中,使膜浸没在DMSO中,振荡10min,使甲臜充分溶解。取出小室,24孔板于酶标仪上测OD值。
擦去基质胶?细胞不是在胶这面吗,这样擦不就把细胞也擦掉了吗

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就是要擦掉,要检测的是穿过膜的细胞
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wood533[使用道具]
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请问楼主,我准备做wnt7a对细胞侵袭的影响,但是不知道transwell下层培养液怎么选择,看了楼主的帖子,是说用5-10%FBS就好,理解好像是说单纯检测细胞invasion,所以想请教楼主我这种情况怎么办?在线等楼主答复,急!

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一种药?可以影响细胞的侵袭能力?
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首先要明确你的实验目的,是做什么实验?侵袭?迁移?共培养?
会不会混在一起,关键是看你的膜上有没有胶,如果有胶是不会混起来的,但如果没胶,应该是能混起来的,不过培养液的相互扩散也是要很长时间的。
另外也要看你的实验目的,是迁移还是共培养?我做迁移,会先在上室加入细胞悬液,过一两个小时再在下室加培养液。如果是做共培养,要把上下室先分开培养,上下室细胞分别贴壁后在放到一起。
如果你是做共培养,不就是要把培养液混在一起吗?否则怎么反映一种细胞分泌的因子对另一种细胞的影响?
如果是共培养,细胞放下层应该也是可以的,如果是做侵袭迁移,当然就不能放下层了。

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谢谢大侠指点,高人
我做的是共培养,因为两种细胞用的培养基不一样,故有第一问。
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zsxan1990[使用道具]
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谢谢大侠!根据我查的资料,迁移试验时一般都是计数细胞,但是我也查到一篇文章说是用显微镜测定距离,不知道该怎么测距离?请高手指点!
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我也想知道怎样测量细胞迁移试验时迁移的距离,用软件还是在显微镜上直接可测?
我这有一篇文章就是测细胞迁移距离的,原文描述如下:
Cultures were fixed and the distance of cell migration away from
the edge of the fragment was analyzed. The maximum
distance of the leading edge of cells was measured in
each experiment, and the number of cells migrated from
the edge of the coverslip was counted within 50-mm
rows.
请指点。
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这个迁移实验是用Transwell做的吗?
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DDD[使用道具]
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chemotaxis experiments in modified multiwell Boyden chambers (Neuroprobe, Gaithersburg, Md.) using nitrocellulose micropore filters (Sartorius, Go¨ttingen, Germany)
were performed as previously described .
After mounting of dehydrated filters to microscope slides migration depth of DC into the filter was quantified by microscopy, measuring the distance (mm) from the upper
surface of the filter to the leading front of five cells,before any cells had reached the lower surface (leading front assay) [21].
大侠,这是原文中的一部分,现在我在北京问了很多代理,买不到modified multiwell Boyden chambers ,我觉得测距离可能和modified multiwell Boyden chambers 有关,看能否帮忙知道具体怎么弄吗?那modified multiwell Boyden chambers和transwell是一个东西吗?谢谢您的帮助!
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is2011[使用道具]
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请教一下,结晶紫染色不固定的话怎么染啊?具体步骤是什么样?除了风干膜以外还需要注意什么吗?
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QUOTE:
原帖由 is2011 于 2012-12-26 17:28 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请教一下,结晶紫染色不固定的话怎么染啊?具体步骤是什么样?除了风干膜以外还需要注意什么吗?


0.1%结晶紫染色,就是称取0.1g结晶紫,加100ml水,这是质量体积比,很简单。
染色也很简单,把膜风干了,在结晶紫里面泡半个小时就差不多了
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